高中生物人教版选修1教学案：专题五 课题2 多聚酶链式反应扩增DNA片段(含答案).docVIP

课题2多聚酶链式反应扩增DNA片段 1．DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从3′端延伸DNA链，因 此，DNA的合成方向总是从子链的5′端向3′端延伸。 2．PCR反应需要DNA模板、两种引物、四种脱氧核苷酸、耐热的DNA聚合酶等条件。 3．PCR利用了DNA的热变性原理，通过控制温度来控制双链的解聚与结合。 4．PCR每次循环都包括变性、复性和延伸三步。 5．DNA聚合酶只能特异地复制处于两个引物之间的DNA序列，使这 段固定长度的序列呈指数扩增。 一、PCR技术的原理 1．细胞内DNA复制的条件[填表] 原料 4种脱氧核苷酸 模板 2条DNA的母链 酶 解旋酶和DNA聚合酶 引物 使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸 2．PCR扩增的原理及条件 (1)概念：PCR即多聚酶链式反应，是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。 (2)原理： 子链的合成：DNA聚合酶只能从3′端延伸DNA链，因此，DNA复制需要引物，DNA合成的方向总是从子链的5′端向3′端延伸。 双螺旋的打开：DNA的热变性原理，即： 双链DNA单链DNA。 (3)条件：DNA模板、分别与两条模板链相结合的两种引物、四种脱氧核苷酸、耐热的DNA聚合酶、一定的缓冲溶液以及能自动调控温度的设备。 二、PCR的反应过程 三、PCR技术的实验操作 1.实验用具 (1)PCR仪：该仪器能自动调控温度，实现DNA的扩增。如果没有PCR仪，可用3个恒温水浴锅代替，操作时按程序在3个水浴锅中来回转移PCR反应的微量离心管。 (2)微量离心管：总容积为0.5 mL，实际上是进行PCR反应的场所。 (3)微量移液器：用于向微量离心管中转移PCR配方中的液体。 2.注意事项 (1)为避免外源DNA等因素的污染，实验中使用的一些用具在使用前必须进行高压灭菌。 (2)所用的缓冲液和酶应分装成小份，并在－20 储存。 (3)在微量离心管中添加反应成分时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头必须更换。 四、DNA含量的测定 1.原理：利用DNA在260_nm的紫外线波段的吸收峰曲线来测定相应含量。 2.计算公式 DNA含量(μg/mL)＝50×(260_nm的读数)×稀释倍数。 1．PCR技术控制DNA的解聚与结合是利用了DNA的(　　) A．特异性　　　　　　　 B．稳定性 C．热变性 D．多样性 解析：选C　DNA分子在80～100 的温度范围内变性，双链解开成单链；当温度缓慢降低时，又能重新结合形成双链。 2．标准的PCR过程一般分为变性、复性、延伸三大步，这三大步需要的温度依次是(　　) A．92 、55 、72 B．72 、55 、92 C．55 、92 、72 D．80 、55 、72 解析：选A　当温度上升到90 以上(90～96 )时，双链DNA解聚为单链，称之为变性；当温度下降到50 左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合；当温度上升到72 左右(70～75 )时，溶液中的四种脱氧核苷酸(A、T、C、G)在Taq DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链，称为延伸。 3．PCR实验中用到微量离心管、缓冲液和蒸馏水，使用前必须进行的关键步骤是(　　) A．反复洗涤 B．用酒精擦洗 C．高压灭菌 D．在－20 ℃保存 解析：选C　在PCR实验中，为了避免外源DNA等因素的污染，微量离心管、枪头、缓冲液和蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌。同时也不能忽视其他操作步骤，如 缓冲液和酶应该分装成小份，并且在－20 ℃保存。 1．生物体内的DNA复制与PCR反应的比较 体内DNA复制 PCR反应 不 同 点 解旋 在解旋酶的作用下，边解旋边复制 加热至90 ℃以上时，双链全部解开 酶 解旋酶、DNA聚合酶 耐高温的DNA聚合酶(Taq DNA聚合酶) 引物 一小段RNA RNA或单链DNA分子片段 合成子链 一条子链连续合成，另一条子链不连续合成 两条子链都是连续合成 温度 体内温和条件 高温 相同点 ①都需提供DNA复制的模板②都需要四种脱氧核苷酸原料③都需要分别与两条模板链相结合的两种引物④子链延伸的方向都是从5′端到3′端 2．PCR的反应过程 (1)变性：当温度上升到90 ℃以上时，双链DNA解聚为单链，如图。 (2)复性：当系统温度下降至50 ℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合，如图。 (3)延伸：当系统温度上升至72 ℃左右时，溶液中的四种脱氧核苷酸在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链，如图。 3．PCR反应的结果 从第二轮循环开始，上一次循环的产物也作为模板参与反应，并且由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链会与引物Ⅱ结合，进行DNA