第四讲分子荧光分析.pptVIP

第四章 分子荧光分析 第一节 基本原理 1、激发光谱曲线和荧光光谱曲线 固定测量波长为荧光最大发射波长，然后改变激发波长，根据所测得的荧光（磷光）强度与激发光波长的关系，即得激发光谱曲线 固定激发光波长为其最大激发波长，然后测定不同的波长时所发射的荧光或磷光强度，即得荧光或磷光光谱曲线 1）荧光发射光谱的形状与激发波长无关 2） Stokes位移 2、荧光发射光谱的特性 3）镜像规则 3、 荧光效率与荧光分子结构的关系 荧光效率 (荧光量子产率) φF越大，化合物的荧光越强。 有分析应用价值的荧光化合物, 其荧光量子产率通常在 0.1～1 之间 φF = 发射的光子数 吸收的光子数 kf kf + Σk ≤ 1 kf ：辐射跃迁的速率常数 Σk：各种非辐射跃迁过程的速率常数之和 = 从分子结构来说,绝大多数能发荧光的物质为含有低能的π→π* 跃迁能级的芳香环或杂环化合物 1)共轭效应 π电子的共轭程度越大，就越容易被激发,分子的荧光效率越大,而且其最大荧光波长也会相应地“红移”——向长波长方向移动 2)刚性结构和共平面效应 给电子取代基, 产生n-π共轭效应, 加强荧光。 3)取代基的影响 a.?????? 吸电子取代基,会使荧光减弱,如硝基苯无荧光。 4)化学环境对荧光的影响 温度：温度越低，φF越大 5)溶剂 6) pH值的影响 4、荧光的猝灭 荧光物质的分子与溶剂分子或其它溶质分子相互作用，引起其荧光强度降低，消失或荧光强度与浓度不呈线性关系的现象 原因： 猝灭剂分子与荧光物质发生化学反应 溶解氧的存在 : 氧化荧光物质 自猝灭 : 高浓度时发生(自碰撞失活) 第二节 荧光分光光度计 第三节 分子荧光分析法的应用 Zhao, et al. JACS, 2003, 125,11474 Fluorescence 基于硅纳米球的DNA分析技术 loop stem “分子信标”的检测原理 应用：实时定量荧光PCR 探针与DNA杂交时产生荧光 -----变性过程：产生非特异性荧光 -----退火过程：产生特异性荧光，检测荧光信号 -----延伸过程：不产生荧光 新型纳米荧光材料－量子点( quantum dots, QDs ) Goldman, et. al. Anal. Chem. 2004, 76, 684-688.