植入前遗传学诊断PPT.ppt

无忧PPT整理发布 P o w e r B a r 中国专业PPT设计交流论坛 植入前遗传学诊断新进展 preimplantation genetic diagnosis(PGD)′s latest progress 主讲：吴振楠 2009041101 组员：王芳，吴明瑶 PGD的定义，应用及分类 植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis /PGD)是辅助生殖技术与遗传学诊断技术相结合的一种植入前诊断技术，为遗传病高危夫妇提供尽可能大的选择范围，把对某些疾病发现和诊断的时机提前到胚胎发育的最早阶段，阻断一些单基因疾病及染色体异常疾病的发生是辅助生殖技术的一个重要方面。 PGD的常规方法 目前应用于PGD的常规方法有聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)和荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization．FISH) 常用的PCR类型有巢式PCR、多重PCR、荧光PCR、荧光定量PCR等。PCR扩增后，用于后续基因诊断的方法主要有：①根据特异性目的条带的有无做出诊断，主要用于由基因缺失而引起的疾病的诊断。②多态性分析，即在致病基因附近寻找几个与其紧密连锁的DNA多态性位点。通过连锁分析进行诊断和携带者检测。③等位基因寡核苷酸特异探针(allele．specific oligonucleotide。ASO)斑点杂交及反向斑点杂交(reverse dot blot，RDB)。④单链构象多态性(single．strand conformation polymorphism analysis。SSCP)及变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gelelectrophoresis，DGGE)等 FISH是用带有荧光标记的特异性探针与染色体结合后，在荧光显微镜下观察特定染色体的情况。常用于PGD的FISH探针有染色体记数探针(CEP)、染色体特异单一序列探针(CSI)等，针对不同的需要可以选用不同的探针。 除了上述方法外，一些新方法、新技术不断出现并应用到临床PGD中。 一、微阵列比较基因组杂交 二、微测序技术 三、多重置换扩增 二、微测序技术 微测序技术，又称为单核苷酸引物延伸法(single nucleotide primer extension，SnuPE)，是一种有多种用途的新技术，已经广泛应用于法医学、人口遗传学等领域。 其原理是设计一对针对突变位点的特异性引物，退火后直接结合于突变位点附近，同时加入与野生型及突变型模板互补的一种荧光双脱氧核苷酸，分别用不同的颜色标记4种双脱氧核苷酸，经过多轮的延伸与链终止过程，产生许多带有荧光标记的核苷酸片段，经毛细管电泳从而实现对模板序列的推导。 微测序技术具有快速、敏感的特点，结合毛细管电泳技术可以一次实现对多个突变位点的检测而实现高通量分析。微测序技术开始主要用于检测单核苷酸多态性(·single nucleotide polymorphism，SNP)的突变位点。 三、多重置换扩增 多重置换扩增(multiple displacementamplification，MDA) MDA是一种基于酶促反应而不依赖热循环的DNA体外等温扩增技术，可用于质粒、细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome，BAC)及全基因组DNA的扩增。认为用MDA进行全基因组扩增(whole genome amplification，WGA)是当前效率最高的全基因组扩增方法。基因组中不同位置的各个位点都能通过MDA实现相似的扩增效率。Hellani等报道首例应用MDA诊断地中海贫血及囊眭纤维化的PGD。后来用于其他疾病的报道逐渐增多，如Marfan综合征等。 MDA的缺陷有嵌合性DNA重排，包括序列倒位、序列重新拼结等。用于PGD时，MDA的主要缺点是等位基因脱手13(allele dropout，ADO)。不同位点的ADO大致在13％～36％左右。虽然ADO发生率较高，但误诊的风险仅为0．02％，这是因为在同时分析多个诊断性相关的位点的情况下，即使MDA有较高的ADO率，但不可能同时干扰所有的诊断位点，从而保证其有较低的误诊率。 PGD的安全性 PGD是建立在IVF（体外受精）基础上的一项技术。除了常规的体外操作外，胚胎还受到在配子或胚胎时期取材所受的机械或化学刺激，以及胚胎时期取材导致的胚胎物质减少等方面的影响。表观遗传学的研究表明，遗传印迹的甲基化等表遗传修饰主要发生于配子发育和种植前阶段，而此期正是体外操作阶段，会干扰基因组印迹的建立与维持，从而造成表观遗传学疾病。 Nekkebro