植物单细胞培养概论PPT.ppt

植物单细胞培养方法 小组成员：胡晏榕、高华、韦玉连、杜侣佩、杨迪、梁宇薇 一、植物单细胞培养相关概念 1、植物的单细胞培养： 在适宜的条件下，一个来自已分化的根、茎、叶等组织的细胞，经过离体培养可以发育成同其亲本一样的完整植株。 植物组织培养技术的重要理论基础是植物细胞的全能性 植物的单细胞培养，在无菌和人为控制外因的条件下，培养、研究植物组织器官，甚至进而从中分化、发育出整个植株的技术。 2、愈伤组织： 原指植物体受伤时产生于伤口周围的组织。现多指切取植物体的一部分，置于含有生长素和细胞分裂素的培养液中培养，诱导产生的无定形的组织团块。 3、外植体： 把由活植物体上切取下来以进行培养的那部分组织或器官叫做外植体 愈伤组织例图 二、植物组织培养特点及其意义 特点： ①培养条件可以人为控制 ②生长周期短，繁殖率高 ③管理方便，利于工厂化生产和自动化控制 意义：①研究细胞生理代谢过程及各种影响因子； ②用于植物品种的改良； ③用于植物次生代谢物质的生产 三、单细胞培养 （Single cell culture） 单细胞的分离 单细胞的培养方法 机械法第一种方法： 用刀片刮叶片 撕去下表皮 露出叶肉细胞 用解剖刀刮下细胞 机械法第二种方法：叶片研碎、离心 研碎成粉 加研磨介质 过滤、离心 从愈伤组织中分离单细胞 将愈伤组织进行振荡培养，使其分散成小的细胞团伙单细 胞，然后用适当孔径的细胞筛过滤，除去大的细胞团和残渣， 离心除去小的残渣，得到单细胞悬浮液。 酶解法 Takebe等（1968）最早报道：用果胶酶处理可以分离大量的叶肉细胞 加果胶酶 过滤、离心 通过原生质体再生法获取单细胞 外植体、愈伤组织或细胞团通过纤维素酶和果胶酶等的作用，除去细胞壁得到原生质体。 植物单细胞培养方法 液体浅层静置培养法 固体平板培养法 看护培养法 微室培养法 1、液体浅层培养法 将悬浮在培养液中的细胞过滤，得到游离单细胞和小细胞团 培养在浅层液体培养基中 液体培养基 用途：主要用来增殖细胞。 特点 操作简便； 分离单细胞系比液体浅层培养容易； 培养细胞气体交换不畅。 固体培养基 2、固体平板培养法 具体步骤： 1、单细胞悬浮液的制备，并计数 2、调节细胞密度 3、培养基的选择与凝固剂选择，浇平板 4、接种培养 3、看护培养法 看护培养的含义及用途 含义：指用一块活跃生长的愈伤组织来看护单个细胞，并使其生长和增殖的方法。 用途；诱导形成单细胞系。 缪尔（Muir）1953首先用此法培养出烟草单细胞株。Sharp(1972)成功将此法用于番茄的花粉培养，诱导花粉形成单倍体细胞系。 特点： 有利于有毒物质的扩散； 有利于气体交换； 不利于定点观察； 单细胞生长、分裂后，难以得到单细胞系。 看护培养（Nurse culture）图示： Nurse callus Filter paper Single cell 单细胞无性系 恒温培养1个月 2~3月 用一块活跃生长的愈伤组织来看护单个细胞，并使 其生长和增殖。这个愈伤组织称块为看护愈伤组织