江南大学4-糖代谢与控制 - 副本PPT.ppt

1、出发菌株选择 芽孢杆菌属的细菌转酮酶缺陷突变株积累D-核糖具有普遍性。而E.coli、鼠伤寒沙门氏等细菌的转酮酸缺陷突变株并不积累核糖，因此多采用芽孢杆菌属细菌。 4.2.4 D-核糖发酵的代谢育种技术 2、转酮酶缺陷突变株的分离（选育） ①选育不利用D-葡萄糖酸或L-阿拉伯糖的突变株，因为D-葡萄糖酸和L-阿拉伯糖必须通过磷酸戌糖途径进行代谢，若转酮酶发生缺陷，那样菌体自然也就不能利用D-葡萄糖酸或L-阿拉伯糖。 ②选育莽草酸缺陷突变株 ③选育L-Trp-、L-Tyr-、L-Phe-、CoQ-、Vk-或Vm-、 4-磷酸赤藓糖营养缺陷型、 转酮酶缺陷型、转醛酶缺陷型。 1989年,Kishimoto 选育到的短小芽孢杆菌产量达到92 g/L 1997 年邓崇亮等通过紫外线和甲基磺酸乙酯诱变选育莽草酸营养缺陷型菌株发酵 72 h 产核糖 55 g/L。 1999 年谢红等用紫外线照射筛选到一株草莽酸缺陷型枯草芽孢杆菌, 产D- 核糖42 g/L 以上 46.6 g/L 3、其它标记 在维持转酮酶缺陷的情况下，进一步诱变使菌体带上具有高葡萄糖脱氢酶活性、高葡萄糖酸激酶和丧失孢子形成能力，可使D-核糖大量积累。 ? ? 小林等人将葡萄糖脱氢酶基因克隆到载体质粒PHY300PLK中，然后转化到枯草芽孢杆菌中去。构建扩增葡萄糖脱氢酶的D-核糖工程菌，350C发酵80 h可积累D-核糖49 g/L 。 4、利用基因工程技术构建D-核糖工程菌株 发酵培养基： 碳源：葡萄糖、D-甘露糖、山梨醇、D-甘露醇、麦芽糖、 乳糖、甘油、 糊精、可溶性淀粉等。 氮源：干酵母、酵母膏、牛肉膏、蛋白胨 、玉米浆 、(NH4)2SO4 其他：磷酸盐，碳酸盐，适量微量元素。 要在好氧条件下，pH中性，温度37 0C 。 5、发酵控制 D-核糖典型发酵过程曲线 第四章 糖代谢与控制生命科学学院胡庆森 3.1 糖代谢与调节 3.2 微生物发酵法生产D-核糖 3.3 微生物发酵法生产柠檬酸 糖代谢的途径 糖代谢的主要途径有： 1.糖的酵解途径——EMP途径 2.TCA循环 3.HMP途径（磷酸戊糖途径） 4.ED与PK 途径（不作为重点，自学） 4.1 糖代谢与调节 糖酵解(glycolysis)一词来自希腊语 (glykys meaning “sweet,” and lysis, meaning “splitting”)，该途径的全过程已于1940年完全弄清楚。 糖酵解途径是葡萄糖经1,6-2磷酸果糖降解为丙酮酸的过程，又称为EMP途径(Embden-Meyerhof Pathway）或HDP途径（双磷酸己糖途径）。 从葡萄糖开始降解到生成为丙酮酸，包括10个独立但连续的反应。 4.1.1 糖酵解(glycolysis)途径的特点及调节机制 P 3 P P O O H O H C H 2 C H 2 O O 1 2 5 4 6 P 磷酸二羟丙酮 1 2 3 + P ②异构 6-磷酸果糖 P 5 6 4 磷酸甘油醛 P P 1，3-二磷酸甘油酸 P C O H C O H H 2 C O O H 3-磷酸甘油酸 P 2-磷酸甘油酸 P 磷酸烯醇式丙酮酸 丙酮酸 6-磷酸葡萄糖 P G 葡萄糖 ①活化 ④裂解 ⑥脱氢 ⑤异构 P P 1，6-二磷酸果糖 ③活化 ⑦产能 ⑨脱水 ⑧异构 ⑩产能 H H OH 糖原（或淀粉） 1-磷酸葡萄糖 6-磷酸葡萄糖 6-磷酸果糖 1，6-二磷酸果糖 3-磷酸甘油醛?磷酸二羟丙酮 2?1，3-二磷酸甘油酸 2?3-磷酸甘油酸 2?2-磷酸甘油酸 2?磷酸烯醇丙酮酸 2?丙酮酸 耗能阶段 产能阶段 葡萄糖 EMP途径 +2ATP +2ATP -1ATP -1ATP CH2ICOOH 不可逆抑制 3-磷酸甘油醛脱氢酶 ? 氟化物是烯醇化酶的 不可逆抑制剂。 ? 无氧条件下即可反应 糖原（或淀粉） 1-磷酸葡萄糖 6-磷酸葡萄糖 6-磷酸果糖 1，6-二磷酸果糖 3-磷酸甘油醛?磷酸二羟丙酮 2?1，3-二磷酸甘油酸 2?3-磷酸甘油酸 2?2-磷酸甘油酸 2?磷酸烯醇丙酮酸 2?丙酮酸 葡萄糖 +2ATP +2ATP -1ATP -1ATP EMP途径总的反应式如下所示。 C6H12O6+2ADP+2Pi+2NAD+→2CH3COCOOH+2ATP+2NADH 所生成的丙酮酸，在不同