第13章 第35讲 基因工程PPT.ppt

现代生物科技专题;知识内容;知识内容;知识内容;1.限制性内切酶和DNA连接酶 (1)限制性内切酶只能识别DNA分子中特定的　　　　　　　，所以通过限制性内切酶形成的DNA片段不一定是完整的基因，需要进行　　　，但这些DNA片段末端的脱氧核苷酸序列是　　　，这也说明了酶具有　　　性。 (2)限制性内切酶切出的DNA片段有　　　　.末端和　　　末端。;(3)限制性内切酶断裂的是DNA分子中　　　　　　　　.的键，若是从一条DNA分子中切出一个完整的基因，那么需要断裂　　　个这样的键。 (4)DNA连接酶连接的是　　　　键。;2.基因运载体的条件 (1)要保证能和目的基因进行连接，所以运载体上必须有　　　　　　　　　　。 (2)运载体的目的是将目的基因导入受体细胞，所以目的基因应当能够在受体细胞中　　　，并且能　　　　，以防止重组DNA丢失。 (3)为了方便检测目的基因是否导入受体细胞并表达，运载体最好有　　　　存在。;3.基因工程的一般操作过程 (1)获取目的基因 ①酶切法 a.酶切法首先要求DNA分子中有　　　.存在，然后利用　　　　　　将DNA分子在特定的酶切位点切成多个DNA片段。 b.由于限制性内切酶具有专一识别特定的脱氧核苷酸序列的特性，所以切出来的DNA片段的末端都是　　，需要进行　　，才能得到目的基因。;②利用PCR技术扩增目的基因 使用PCR技术的前提是要有　　　　，其结果是产生更多的目的基因。原理　　　　。 ③人工合成法 a.如果知道氨基酸的序列，通过推测计算出来的目的基因的脱氧核苷酸序列可能有好多种，其原因是　　　　　　　　　　　　　。 b.通过逆转录形成的目的基因的脱氧核苷酸序列具有惟一性，其原因是逆转录的过程中遵循　　　　　　　原则。;(2)基因表达载体的构建 ①首先用　　　　　　　　　将运载体切出一个具有相同末端的切口。 ②用　　　　　　将目的基因和运载体的末端进行连接。 ③基因表达载体的基本组成为　　　 、　　　、　　 、　　　 。 ④意义：基因工程的　　　。;(3)将目的基因导入受体细胞 受体细胞不同，导入重组运载体的方法也不同，植物通常使用　　　　　　　，动物使用　　　　　??。 (4)目的基因的检测和鉴定 ①导入检测使用的是DNA探针，其中DNA探针的实质是　　　　　　。 ②表达检测既可以检测 的产物，也可以检测的产物　　　。;5.蛋白质工程 基因工程原则上只能生产　　　　　.是　　　　　　　　蛋白质，蛋白质工程是以　　　　　　　　　　　　　　　　　的关系作为基础，通过　　　　或　　　　，对现有的蛋白质进行改造，或者制造出一种新的蛋白质的工程技术。; 1.质粒或者运载体作为目的基因导入受体细胞的工具，必须具备下列要求：(1)能够在受体细胞中存在；(2)能够随着受体细胞DNA的复制而复制；(3)有特定的酶切位点，能够和目的基因连接；(4)通常具有标记基因，便于目的基因的检测和表达。准确把握每种需求的意义是解题的关键。 2.限制性核酸内切酶是将DNA切成片段，而DNA连接酶的作用与之相反，是将多个DNA片段连接成一个DNA，作用的化学键都是一样的，都是磷酸二酯键。; ;A.CTTAAG，切点在C和T之间 B.CTTAAG，切点在G和A之间 C.GAATTC，切点在G和A之间 D.GAATTC，切点在C和T之间;　　由题意知，该限制酶识别的核苷酸序列是GAATTC，专一切点是G和A。切出的两个完全相同的黏性末端是AATT和AATT，两个黏性末端的关系是碱基互补配对，解决此类型题的规律是DNA限制性内切酶具有专一性，专一识别特定的核苷酸序列和酶切位点，切出的DNA片段具有两个完全一样的黏性末端，并且这两个黏性末端碱基互补配对。; 　　下列黏性末端属于同一限制酶切割而成的是(　);　　首先判定相同的黏性末端才是由同一种限制酶切出的，然后要判定相同的两个黏性末端上的碱基是否互补配对。;　　质粒之所以能做基因工程的运载体，是由于它(　) A.含蛋白质，从而能完成生命活动 B.能够自我复制，而保持连续性 C.是RNA，能够指导蛋白质的合成 D.具有环状结构，能够携带目的基因;　　　作为基因的运输工具——载体，必须具备的条件及理由是( ) A.能够在宿主细胞中稳定地保存下来并大量复制，以便提供大量的目的基因 B.具有多个限制酶切点，以便于目的基因的表达 C.具有某些标记基因，以便于目的基因的表达 D.能够在宿主细胞中复制并稳定保存，以便于进行筛选;　　多个酶切位点的存在是为了和目的基因的连接，而不是便于目的基因的表达，便于目的基因的表达则需要运载体能够随着受体细胞内DNA的复制而复制；标记基因的需求是为了便于目的基因的检测和表达。;　　DNA连接酶催化的反应是(　)