第1讲 基因工程导论 应用和安全性管理 2012PPT.ppt

* 基因工程genetic engineering 生 物 工 程 微生物工程 基 因 工 程 细 胞 工 程 酶 工 程 绪论 学科诞生的理论和技术基础 基因工程的概念和研究内容 基因工程的应用和发展 基因工程的研究动态 基因工程技术诞生的 3 大理论基础 ▼ 20世纪40年代，O.T.Avery发现生物遗传信息的化学本质是DNA而非protein(肺炎球菌转化实验) ▼ 20世纪50年代，Watson-Crick提出DNA的双螺旋结构模型；半保留复制机理；解决了基因的自我复制和传递问题 ▼ 20世纪60年代，相继提出“中心法则”和操纵子学说, 成功破译遗传密码43，阐明遗传信息的流向和表达问题 20世纪40-60年代的3大理论发现，从理论上确立了基因工程的可能性，但在进行基因工程技术操作时，科学家仍面临3个基本技术问题： ① 如何从生物体庞大的双链DNA分子中将所需要的 基因片段切割下来； ② 如何将所切割下来的DNA片段进行繁殖扩增； ③ 如何将所获得的基因片段重新进行连接。 1970年 Baltimove和Temin等同时各自发现了 逆转录酶，完善了遗传学中心法则，使真核基因的 制备成为可能 ▼ 逆转录酶 1、真核基因组庞大而复杂，基因图谱不易制得， 2、基因多有内含子，不能在原核表达系统剪接出成熟的mRNA，难以获得相应的产物， 逆转录酶的用途： mRNA → cDNA (complementory DNA）→构建文库 、分离目的基因 ▼ 连接酶 1967年 世界上5个实验室几乎同时发现DNA连接酶： 该酶参与DNA单链裂口(gap)或缺口(nick)的修复， 连接DNA分子的自由末端 1970年 Wisconsin大学 H.G.Khorana实验室发现 T4 DNA连接酶 活性更高，能催化完全分离的两段DNA分子进行平末端的连接 ▼ 载体 早期载体工作的研究对象：噬菌体； 侧重于研究病毒和寄主细菌间的关系 1946年 L.Berg研究细菌性因子(F因子), 50-60年代 相继发现抗药性R因子：分子量小， 具有抗药性选择标记和易于操作等优点 1973年 S.Cohen将质粒作为基因工程载体使用 20世纪40年代 Avery发现外源DNA分子导入细菌细胞的转化现象(肺炎链球菌实验，发现DNA是遗传信息的携带者而非蛋白质) ▼ 受体 1970年 Mandel和Higa发现，大肠杆菌的细胞经过氯化钙的适当处理后，便能够吸收λ噬菌体的DNA 1972年以后，大肠杆菌成为分子克隆的良好受体 20世纪70年代的上述发现，从技术层面上解决了用基因工程改良生物的实际问题，最终促成了基因工程学科的诞生 ?第一个重组体的构建 1972年，美国斯坦福大学P.Berg等在PNAS上发表了题为∶“Biochemical methode for inserting new genetic information into DNA of Simian Virus 40: circular SV40 DNA molecules cotaining lamda phage genes and the galactose operon of Escherichia coli. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 69:2904-2909, 1972”，标志着基因工程技术的诞生 2 个重大历史事件 1972年，美国斯坦福大学 P.Berg博士等 用E.coRⅠ酶切猿猴病毒SV40 DNA和λphageDNA后， 用T4 DNA连接酶将两种消化片段连接成重组体分子 意义：世界上第一次成功的DNA体外重组实验 P.Berg的贡献：  ?第一个有功能的重组体的构建 ◆虽然Berg的工作具有划时代的意义，但是他们并没有证明体外重组的DNA分子具有生物学功能 ◆1973年，S.N.Cohen等在PNAS上发表文章“Construction of Biologically Functional Bacterial Plasmid In Vitro” （S. N. Cohen, A. C. Y. Chang, H. W. Borer, and R. B. Helling, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 70:3240-3244, 1973）宣布体外构建的细菌质粒能够在细胞中进行表达，完善了Berg开创的基因重组技术 Cohen的贡献： 1973年, 斯坦福大学 S.N.Cohen 等将E.coli的 R6-5质粒DNA：编码卡那霉素（kanamycin）抗性基因 pSC10