第7讲 种质资源的离体保存PPT.pptx

第七讲 植物种质资源的保存 种质资源保存的方式广西河池地区的九万山自然保护区桂林花坪国家自然保护区国家种质广州野生稻圃占地面积6.7亩，采用种茎盆栽保存，有围墙、喷灌和遮光设施。现有圃管理和研究人员5人，已保存国内外野生稻及其近缘种27个种共4383份资源。中国轻工总会甘蔗糖业研究所海南三亚市崖城镇的海南甘蔗育种场的种质资源圃，保存有甘蔗种质资源2003份 水稻品种资源的保存离体保存的意义离体保存： 短期保存按保存时间长短 中期保存 长期保存 一般保存按保存方式不同 缓慢生长法保存 超低温保存一般保存：在常规培养条件下对培养物通过不断继代的方法进行保存的方式，属于短期培养。 如华中农大采用该种方法保存柑橘胚性愈伤组织达16年之久。 优点：有利于种质的交换运输和去病毒，可以随时进行扩繁，便于利用。缺点：保存过程比较繁杂，需要不断继代培养，如果不慎，易导致材料的污染和混淆，且由于连续继代，常会导致遗传变异的发生。缓慢生长保存法：通过调节培养条件，抑制保存材料的生长，实现延长继代时间，减少操作和劳力的保存方法。具体的技术措施:（l）降低培养环境中的氧气浓度：如在保存材料上覆盖一层矿物油(CaPlin 1959；Bill etal, 1989)或直接减少环境中的氧气浓度(Engelmann etal，1990)。如印度萝芙木的保存中，10℃和5℃保存的材料在3个月内相继死去，用聚丙醇帽代替棉塞封试管口，在15℃下培养物保存9个月,成活率达100%;（2）高渗保存法： 在培养基中加入高渗物质提高培养基渗透压，抑制培养物生长的保存方法。 高渗物质：甘露醇、山梨醇、蔗糖、 PEG（分子量6000-8000） 高渗保存配合低温条件效果更好，如6-10 ℃低温下，培养基+4%甘露醇，可使马铃薯保存1-2年，存活率最高达90%。龙眼的愈伤组织： MS+1.0mg/L2,4-D+2%甘露醇，使继代时间由20天延长至35-40天，配合16°的低温，可使继代时间延长至60天。(3)营养控制（饥饿法）： 降低培养基中的养分，延缓材料的生长速度，达到保存的目的。 如菠萝试管苗在无菌水和1/4MS中保存一年，存活率81%，且比保存在完全的MS培养基中的试管苗活力强,这一技术己在美国Hilo国家无性系资源圃菠萝种质保存中应用。 甘蔗顶芽在不添加生长调节剂的1/2MS培养基中在18℃保存14个月。 香蕉茎尖在只含核糖的棉花基质中,17℃下可保存2年。(4)培养基中加入一定量的生长抑制剂： ABA、CCC、PP333、B9、青鲜素等如在猕猴桃离体保存时,培养基中加入0.1PPmABA 和50PPmB9 能够有效地抑制试管苗的生长，在室温下能保存9个月(郭延平等,1992)。 马铃薯试管苗：4°C，MS+CCC600mg/L，继代时间由100天左右延长到240天以上。或加入抗生素 如木薯种质资源离体保存：将试管苗继代培养在生长抑制培养基中 ：MS+0.2mg/L NAA+80mg/L Kana +30g/L蔗糖+9g/L琼脂,pH=5.8。 试管苗能正常生长保存22～24个月以上,是对照(不加Kana)保存时间的10～12倍,且试管苗的根系较发达、节间显著缩短、茎节数显著增加、茎杆明显增粗、叶色浓绿, 温室移栽成活率高达90%以上,是对照的5～8倍。几种方法结合取得更好效果： 9℃低温下，培养基中加入甘露醇,芋每3a继代一次，保存时间超过8年，仍有90%以上的培养物保持活力,但其再生率显著低于2年继代一次的材料(Bessembinder etal, 1993)。 Seibi等用1/4MS培养基加入多效唑的方法对近200个梨品种进行了离体保存(Seibi andTakao，1997)。(5)降低培养温度： 采用控制温度来降低或完全抑制保存材料生长的研究更为普遍。 其原理：组织的代谢活动随着温度的降低而减弱甚至完全停止,对保存冷敏性的热带植物,低温保存往往不易进行。 常用的温度范围有四种： 常温(10~30℃) 常低温(0-10℃) 低温(0~-80℃) 超低温(-80℃以下)超低温保存法： 在-80℃以下的超低温中保存种质资源的技术方法。超低温常用的冷源有干冰（-79℃)、超低温冰箱（-80℃）、液氮（-196℃)及液氮蒸汽相（-140℃) 优点：超低温保存可以克服常温及低温保存过程中,由于不断继代而产生的遗传变异,并且还可以减少工作量,减少污染等。 不同的植物材料如愈伤组织、胚轴、茎尖、花粉、根尖、休眠芽、原生质体等。 至今已有70多种植物采用芽及茎尖分生组织成功地进行超低温保存,超低温保存的理论基础（一）细胞冰冻结冰与伤害理论：冰冻产生的伤害： 1、 胞内结冰使细胞结构破坏-----机械伤害。 2、 使原生