第七章微生物的生长PPT.ppt

第七章 微生物的生长繁殖;第一节 微生物纯培养的生长 ;一、微生物纯培养的分离方法 （一）稀释倒平皿法;（二）划线法;（三）单细胞挑取法 ;二、微生物生长量的测定;1、测定微生物的数量 ? 细菌个体细胞一般太小，通常采用电子显微镜观测，但无法观测到整个生长的动态过程。 真菌细胞相对体积较大，可采用显微镜观测和记录活细胞的整个生长过程，如使用微分—干涉相差显微镜、相差显微镜和荧光显微镜等进行。 ;计数器直接计数法;应用：可同时计数不同微生物的菌数，适 于土壤、牛奶中细菌计数。 方法：用镜台测微尺计算出视野面积；取 0.1ml菌液涂于1cm2面积上，计数后 代入公式： 每ml原菌液含菌数 =视野中平均菌数×涂布面积/视野面积×100 × 稀释倍数;（3） 比浊法:分光光度计 根据细菌悬浮液的透光量间接地测定细菌的数量，细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比，与光密度(OD)成正比。 因此用分光光度计测定菌数，用OD表示样品菌液浓度;;2) 薄膜过滤计数法:; 将一定量的菌液中的菌体通过离心或过滤分离出来,然后烘干(干燥温度可采用105℃、100℃或80℃)、称重。一般干重为湿重的10%—20%，而一个细菌细胞一般重约10-12—10-13g。 该法适合菌浓较高的样品。 举例：大肠杆菌一个细胞一般重约10–12~10–13g，液体培养物中细胞浓度达到2×109个/ml时，100ml培养物可得10~90mg干重的细胞。 ;2.测定细胞物质量;;第二节 微生物纯培养的生长规律 ;将少量单细胞的纯培养，接种到一恒定容积的新鲜液体培养基中，在适宜条件下培养，每隔一定时间取样，测菌细胞数目。以培养时间为横坐标，以细菌增长数目的对数为纵坐标，绘制所得的曲线。;1、细菌纯培养的生长曲线;又称：停滞期、调整期、适应期 1.现象：活菌数没增加，曲线平行于横轴。 2.特点： 生长速率常数R= 0 细胞形态变大或增长 细胞内RNA特别是rRNA含量增高，原生质嗜碱性增强 合成代谢活跃（核糖体、酶类、ATP合成加快），易产生诱导酶 对外界不良条件敏感，（如氯化钠浓度、温度、抗生素等化学药物） 3.原因：适应新的环境条件，合成新的酶，积累必要的中间产物;认识延迟期的特点及形成原因对实践的指导意义：;（二）对数期（logarithmic phase，指数期）;细胞数目的对数与生长时间呈正比直线关系;细胞呈指数增长示例;2、指数期中的的三个重要参数;x2; ★代时在不同种微生物中的变化很大，多数微生物的代时为1~3h，然而有些快速生长的微生物的代时还不到10min,而另一些微生物的代时却可长达几小时或几天； ★另外，同一种微生物，在不同的生长条件下其代时的长短也不同；但是，在一定条件下，每一种微生物的代时是恒定的，因此它是微生物菌种的一个重要特征。;一 些 细 菌 的 代 时;3．影响指数期微生物代时长短的因素;营养物浓度与对数期生长速率和产量;应用意义： 指数期的微生物具有整个群体的生理特性一致、细胞各成分平衡增长和生长速率恒定等优点，是： （1）用作代谢、生理等研究的良好材料； （2）是增殖噬菌体的最适宿主； （3）是发酵工业中用种子的最佳材料。 （4）进行染色、形态观察等的良好材料。;（三）稳定期（stationary phase，恒定期、最高生长期）;（3）菌体产量与营养物质的消耗间呈现出有规律的比例 关系（可用生长产量常数Y——生长得率来表示： 表示微生物对基质利用效率的高低 。Y=菌体干重/ 消耗营养物质的浓度 根据产量常数可确定微生物对营养物质的需要量 意义：消耗每g或mol营养物质所产生的菌体干重（g）。 （4）细胞内开始积聚糖原、异染颗粒和脂肪等内含物； （5）芽孢杆菌一般在这时开始形成芽孢； （6）通过复杂的次生代谢途径合成抗生素等对人类有用 的各种次生代谢物（稳定期产物）。;2．稳定期到来的原因;3．生产实践的重要指导意义;（四）衰亡期（decline phase）;什么时期菌体代谢产物最多;（三）研究生长曲线的意义： （1）对数生长期以菌体生长为主，稳定期以代 谢产物合成与积累为主。根据发酵目的的 不同，确定在微生物发酵的不同时期进行 收获； （2）微生物生长曲线可以用于指导微生物发酵 工程中的工艺条件优化以获得最大的经济 效益； （3）如何利用生长曲线指导生产？种龄：利用 对数