第二章 细胞培养液PPT.ppt

1.血清种类 目前用于组织培养的血清主要是牛血清，培养某些特殊细胞也用人血清、马血清等。选择用牛血清培养细胞的原因：来源充足、制备技术成熟、经过长时间的应用考验人们对其有比较深入的理解。牛血清对绝大多数哺乳动物细胞都是适合的，但并不排除在培养某种细胞时使用其他动物血清更合适 2.血清的主要成分 血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的 3.血清主要作用 提供基本营养物质：氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物等，是细胞生长必须的物质。 提供激素和各种生长因子：胰岛素、肾上腺皮质激素（氢化可的松、地塞米松）、类固醇激素（雌二醇、睾酮、孕酮）等。生长因子如成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板生长因子等。 提供结合蛋白：结合蛋白作用是携带重要地低分子量物质， 4.细胞培养中使用血清的缺点 血清成分复杂 血清不是细胞接触的生理学液体 血清含一些对细胞产生毒性的物质，如多胺氧化酶，能与来自高度繁殖细胞的多胺反应形成有细胞毒性作用的聚精胺 补体、抗体、细菌毒素等都会影响细胞生长，甚至造成细胞死亡。 动物个体不同，血清产地、批号不同，每批质量差异甚大，其成分不能保持一致。 支原体、病毒，对细胞产生潜在影响 5.血清的质量标准:血清质量高低取决于两方面因素 一是取材对象，二是取材过程 用于取材的动物应健康无病并且在指定的出生天数之内，取材过程应严格按照操作规程执行，制备出的血清要经过严格的质量鉴定 理化性质： 微生物检测： 促生长效果： 6.血清的使用与储存:正确的使用及保存血清，才能使血清发挥应有的作用 使用前处理：大部分血清在使用前必须灭活处理，即56℃30分钟。灭活的目的是去除血清中的补体成分，避免补体对细胞产生毒性作用。血清经过灭活也会损失一些对细胞有利的成分，如生长因子，因此也有人提出血清不经灭活直接用于培养，这样做的前提是确认血清中不含补体成分。对于一些品质高的胎牛血清和新牛血清可以考虑不经灭活直接用于细胞培养。 二、胚胎浸出液  胚胎浸出液(embryonic extract)是早期动物细胞培养中应用的天然培养基，现已很少使用 三、水解乳蛋白 水解乳蛋白(lactalbumin hydrolysate)为乳白蛋白经蛋白酶和肽酶水解的产物，含有丰富的氨基酸，是常用的天然培养基，可用于许多细胞和原代细胞的培养 第四节 合成细胞培养基 基本组分 常用细胞培养基 干粉培养基的配制 合成培养基是根据天然培养基的成分，用化学物质模拟合成、人工设计、配制的培养基。它有一定的配方，是一种理想的培养基。目前合成培养基多达10多余种，有的培养基仍在不断进行改良。早期组织培养是利用天然培养基，目前合成培养基已经成为一种标准化的商品 一、基本组分 基本培养基包括四大类物质：无机盐、氨基酸、维生素、碳水化合物。 无机盐：CaCl2 KCl MgSO4 NaCl NaHCO3 NaH2PO4。对调节细胞渗透压、某些酶的活性及溶液的酸碱度都是必须的。 氨基酸：缬氨酸、亮、异亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精氨酸、胱氨酸(L型) 碳水化合物：是细胞生命的能量来源，有的是合成蛋白质和核酸的成分。主要有葡萄糖、核糖、脱氧核糖和丙酮酸钠等。体外培养动物细胞时，几乎所有培养基或培养液中都以葡萄糖作为必含的能源物质 二、常用细胞培养基 (1).MEM细胞培养基系列(2).DMEM细胞培养基系列(3)RPMI-1640细胞培养基系列 (4).199细胞培养基系列(5).水解乳蛋白细胞培养基 (6)欧氏平衡盐（参看本网站-产品展示） (7)F-10,F-12细胞培养基系列 (8)其它类型细胞培养基 第二章 细胞培养液 内容 水与平衡盐溶液 细胞培养基的基本要求 天然细胞培养基 合成细胞培养基 无血清技术及其培养基 其他细胞培养用液 细胞的生长需要一定的营养环境，用于维持细胞生长的营养基质称为培养基 它是提供细胞营养和促进细胞生长增殖的物质基础。细胞培养基其组成成分主要有：水、氨基酸、维生素、碳水化合物、无机离子及其他一些入核酸降解物、激素等 第一节 水与平衡盐溶液 1.培养用水:体外培养的细胞对水质特别敏感，对水的纯度要求较高。培养用水中如果含有一些杂质，即使含量极微，有时也会影响细胞的存活和生长，甚至导致细胞死亡。用金属蒸馏器制备的蒸馏水，可能会含有某些金属离子，一般不作为培养用水。配制培养用液应