第五章 植物细胞工程制药PPT.ppt

第五章 植物细胞工程制药;5.1 概述 5.2 植物细胞的形态和生理特性 5.3 植物细胞培养的基本技术 5.4 影响植物次级代谢产物累积的因素 5.5 植物细胞培养的生物反应器 5.6 进展与展望 5.7 植物生物转化与生物制药;5.1 概述;5.1.1 基本概念;幼苗及较大植株的培养，即为植物培养（plant culture）； 从植物各种器官的外植体增殖而形成的愈伤组织的培养叫做愈伤组织培养（callus culture）； 能够保持较好分散性的离体细胞或较小细胞团的液体培养，称为悬浮培养（suspension culture）； 离体器官的培养，如茎尖、根尖、叶片、花器官各部分原基或未成熟的花器官各部分以及未成熟果实的培养，称为器官培养（organ culture）； 未成熟或成熟的胚胎的离体培养，则称为胚胎培养（embryo culture）。;细胞培养;分生组织培养（meristem culture）;外植体（explant）;器官形成（organogenesis）;无性繁殖系;突变体;继代培养;次级代谢和次级代谢产物;5.1.2 植物细胞培养发展简史;5.2 植物细胞的形态和生理特性;5.2.1 植物细胞的形态;5.2.2 植物细胞结构特征;5.2.3 细胞后含物和生理活性物质;生物碱（alkaloide）是一类含氮的有机化合物，广布于植物界。 含生物碱较多的植物科有：茄科、罂粟科、小檗科、豆科、夹竹桃科等。 按照植物化学分类学的观点，亲缘关系相近的植物，常含有化学结构相似的成分。此外，一种植物所含的同一类成分中也经常存在多种化学成分，如人参中含有几十种人参皂苷。它们均属于三萜皂苷类成分。中草药中含有多种生物碱，如麻黄碱、咖啡、阿托品、喹啉、黄连素等，其生理活性都很强。;糖苷类糖苷（glucosides）;挥发油（volatile oil）;有机酸（organic acids）;生理活性物质;维生素;植物激素;抗生素和植物杀菌素;5.2.4 植物培养细胞的生理特性;延迟期（lag phase）;加速期（acceleration phase）;对数期（log phase）：介于最大生长率和蛋白质合成完全停止期之间 ，其特征为蛋白质合成能力减退；变化：聚核糖体浓度向有利于单核糖体和寡核糖体形成的方向减少。 稳定期（stationary phase）：细胞数稳定， 其特征为细胞高液泡化、极度脆弱、高度分化，有机化合物的浓度高。;植物细胞培养存在问题;细胞团产生??因：（1）细胞分裂之后没有进行细胞分离；（2）在间歇培养过程中细胞处于对数生长后期时，开始分泌粘多糖和蛋白质，或者以其它形式形成粘性表面，从而形成细胞团。 植物细胞形态上的另一特性，就是其纤维素细胞壁使得其外骨架相当脆弱，表现为抗张力强度大，抗剪切能力小，故传统的搅拌式生物反应器容易损坏植物细胞的细胞壁。再者，植物细胞培养基黏度比较高，且培养时间的延长，细胞数量呈指数上升。;所有的植物都是好气性的，因此培养过程中需要不断地供氧。但是，与微生物细胞相反，它并不需要很高的气液传质速率，而是要控制供氧量，以保持较低的溶氧水平。此外，大多数植物细胞液体培养的pH为5~7，在此pH水平，通气速率过高会驱除二氧化碳而抑制细胞生长，这个问题可通过在通气过程中加入一定浓度的二氧化碳来解决。注意光照的影响。;植物细胞液体培养过程中的泡沫问题不象微生物细胞培养时那么严重，泡沫的性质也不同。气泡比微生物培养系统中的大，而且由于其含有蛋白质或粘多糖，黏度较大，细胞极易被包埋在泡沫中，并从循环的营养液中带出来，这就造成了非均相培养，通常需要采用化学或机械的方法加以控制，否则，随着泡沫和细胞数量的增加，混合和培养过程的稳定性就要受到影响。;在植物细胞液体培养过程中，细胞可能会黏附于培养的反应器壁、电极或挡板的表面上。细胞对表面的黏附及其在器壁上的生长特性，是人们目前正在研究的重点课题之一。通过改变培养基中某些离子的成分，可使表面吸附问题得到一定程度的改善。;5.3 植物细胞培养基本技术;5.3.1 植物材料准备;常用灭菌剂效果比较;植物不同组织（器官）的灭菌时间和步骤;植物材料灭菌后，即可进行培养。接种的外植体的形状和大小要根据试验目的及具体情况而定。当然，如果所用外植体细胞多时，得到愈伤组织的机会必然也多。如要定量研究愈伤组织，则不仅外植体的大小要一致，而且其形状及组织部位也应基本类似。进行这类培养研究常常选用较大材料，如人参、胡萝卜或甜菜的贮藏根、马铃薯的块茎等。;5.3.2 培养基组成;无机盐;碳源;植物生长调节剂;有机氮源;维生素;5.3.4 培养方法;固体培养;温度一般控制在25?1℃之间。有些植物材料在诱导愈伤组织时需要在黑暗条件下进行，但诱导愈伤组织的器官分化和其他材料