第二章+动物细胞培养PPT.ppt

（1）基本组分 合成培养基主要包括四大类物质，分别是无机盐、氨基酸、维生素及糖类。某些种类的合成培养基还包括其它成分，如抗氧化剂、核酸降解物等。 无机盐：不同种类的合成培养基中含有的无机盐种类不同，这些无机盐主要起着三个方面的作用。①无机盐可以为细胞的生长、增殖提供必须的无机盐离子，如Na+、K+、Ca2+、Mg2+等。②无机盐可以调节细胞培养液的渗透压。③某些种类的无机盐具有缓冲作用，可以调节并维持细胞培养液的酸碱度，如NaHCO3、NaH2PO4、Na2HPO4、KH2PO4。 氨基酸：不同种类的合成培养基中都含有8种必需氨基酸（缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、色氨酸、苏氨酸、赖氨酸）以及12种非必需氨基酸中的绝大多数。这些氨基酸是细胞合成蛋白质的原料。 各种合成培养基中都含有谷氨酰胺，这种氨基酸对体外培养的细胞特别重要，细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质。谷氨酰胺的缺乏可导致细胞生长不良甚至死亡。值得注意的是：谷氨酰胺在溶液中很不稳定，4℃下放置1周即可分解50%。因此，超过两周以上的细胞培养液应补加原剂量的谷氨酰胺。最好单独配制谷氨酰胺浓缩液，置于-20℃冰箱中保存，用前融解，补加到细胞培养液中。 维生素：是维持细胞生长的生物活性物质，对细胞的代谢起调控作用。在细胞培养中，尽管血清是维生素的重要来源， 但是许多培养基中都添加了各种维生素，尤以添加水溶性的B族维生素最为常见，因为B族维生素是细胞内许多酶的辅酶及辅基。维生素C在细胞培养基中也是不可缺少的，尤其对具有合成胶原能力的细胞更为重要。此外，有些培养基中还添加有脂溶性的维生素A、D、E、K，以适合更多细胞系的生长。 糖类：是既细胞的能量来源，又是细胞合成某些氨基酸、脂肪、核酸的原料。几乎所有的培养基中都以葡萄糖作为必含的能源物质。此外，丙酮酸钠可作为培养基中的替代能量物质。尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为能量物质，但是，在葡萄糖缺乏的情况下，细胞也可以代谢丙酮酸钠以获取能量。 （2）常用的合成培养基 目前，常用的合成培养基包括：Eagle系列培养基（Basal Medium Eagle，BME、Minimum Essential Medium，MEM、Dulbecco‘s Modified Eagle’s medium，DMEM）、M199、Ham’s F-10和Ham’s F-12、RPMI-1640、McCoy’s 5A培养基、L-15培养基、DMEM/F12培养基等。 在使用合成培养基时需注意：不同生产商生产的同一类型培养基在组成成分、各种成分的含量方面可能有所不同；即使同一生产商生产的同一类型培养基也分为不同的型号，各种型号产品在组成成分及各成分含量方面也会有微小的差异，如Sigma-Alorich?的RPMI1640培养基，有些含有Hepes，有些则不含有该成分。因此，在使用培养基时应详细阅读产品说明书，了解该产品的成分。 某些类型培养基的特点 ①Eagle系列培养基 Eagle于20世纪50年代设计了BME（Basal Medium Eagle，BME），该培养基适用于多种动物细胞的原代培养。对BME的改良使MEM（Minimum Essential Medium，MEM）及DMEM（Dulbeccos Modified Eagles medium，DMEM）得以产生。 MEM中含有更高浓度的氨基酸，与动物蛋白的氨基酸组分接近，适于多种动物细胞的单层生长。 DMEM中的氨基酸及微生素浓度是BME中的四倍，还添加了其它一些成分。目前，商业化的DMEM培养基分为两种，分别是低糖型（葡萄糖含量为1000 mg/L）和高糖型（葡萄糖含量为4500 mg/L）。低糖对于生长速度较快、附着性稍差的肿瘤细胞生长有利；高糖则特别适用于附着性较差但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养，效果较好，所以常用于杂交瘤技术中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。 ②M199 M199是由Morgan和它的同事于1950年设计出来的一种合成培养基，特别适用于非转化细胞的培养，是小鼠胰腺上皮组织、大鼠晶状体组织原代培养中最常用的一种培养基。此外，它还被广泛应用于病毒学、疫苗生产等领域。 ③Ham‘s 营养混合物（Ham’s Nutrient Mixtures） Ham‘s F-10和Ham’s F-12都属于Ham‘s 营养混合物。根据培养细胞的类型，这两种培养基既可以单独使用，也可以添加一定浓度的血清后使用。 ④RPMI-1640 RPMI-1640是Moore等人在20世纪60 年代开发的，RPMI是他们当时工作的研究所（Roswell Park Memorial Institute