第五章 细胞工程制药工艺技术基础PPT.pptVIP

返回 胚胎移植又称受精卵移植，俗称人工授胎或借腹怀胎。它是将家畜的受精卵或发育数日的胚胎，从某一个体（供体）移植到同种动物的另一个体（受体），使之继续发育的技术。经胚胎移植产生的后代从受体得到营养发育成新个体，但其遗传物质则来自它的真正亲代，即供体动物和与之交配的公畜。 利用胚胎移植，可以开发遗传特性优良的母畜繁殖潜力，较快地扩大良种畜群，在自然情况下，牛、马等母畜通常一年产1胎，一生繁殖后代仅仅16只左右；猪也不过百头。采用胚胎移植则使优良母畜免去了冗长的妊娠期，胚胎取出后不久即可再次发情、配种和受精，从而能在一定时间内产生较多的后代。如果向母畜注射促性腺激素，还可诱发其在一个发情期中排出比自然情况下更多的卵子，取得多个胚胎供移植之用。另外，由于胚胎可长期保存和远途运输，还为家畜基因库的建立，品种资源的引进和交换，以及减少疾病传播等提供了更好的条件。 返回 所谓细胞核移植技术，就是将供体细胞核移入除去核的卵母细胞中，使后者不经过精子穿透等有性过程即无性繁殖即可被激活、分裂并发育成新个体，使得核供体的基因得到完全复制。以供体核的来源不同可分为胚细胞核移植与体细胞核移植两种。 第一章 概述 第一章 概述 第一章 概述 第一章 概述 第一章 概述 第一章 概述 * 生 物 制 药 工 艺 学 Biopharmaceutical Technology 第五章 动物细胞工程制药技术 动物细胞工程 细胞融合 核 移 植 胚胎移植 细胞培养 单克隆抗体 动物细胞工程主要应用技术 动物细胞反应动力学、动物细胞反应器 动物细胞工程是指按照人们预定的设计，根据细胞生物学及工程学原理定向改造动物细胞遗传性的技术。 动物细胞培养 基本概念 动物细胞大规模培养方法 动物细胞培养条件 动物细胞培养操作方式 动物细胞培养基的制备 动物细胞培养过程的检测与工艺基的制备 动物细胞培养：就是从动物有机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 基本概念 原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。 细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40-50代，这种传代细胞为细胞株。 细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。 细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。 基本概念 取动物器官 和组织 幼龄鼠 剪碎组织 胰蛋白酶处理 单个细胞 细胞培养 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础 实例 常见生产用动物细胞系 Namalwa：从淋巴瘤病人中分离获得的类淋巴母细胞，非整体核型，2n=12～14，单X染色体，无Y染色体。表达IgM悬浮生长。外源基因的表达水平较高，可用无血清培养基高密度培养。已成功地表达了rhEPO、rhG-CSF、tPA等，已用于大规模生产干扰素，并批准上市。??????? WI-38:美国Wistar研究所从正常人胚肺组织分离获得的二倍体（diploid）成纤维（fibroblast）细胞系，贴附型生长，2n=46。细胞倍增时间24小时，寿命50代，第一个被用于制备疫苗。 人源细胞株系 CHO细胞：从中国仓鼠卵巢（Chinese hamster ovary，CHO）中分离的上皮样（epithelial）细胞系，贴附型生长体性，是目前使用最为普遍和成熟的宿主细胞。属于贴壁生长细胞，可进行悬浮培养，对剪切力和渗透压有较高的忍受能力。蛋白质翻译后的修饰准确，表达产物的结构、性质和生物活性接近天然。 常见生产用动物细胞系 BHK：从幼仓鼠的肾脏（baby hamster kidney, BHK）中分离的成纤维样细胞，非整倍体，2n=44。用于增殖病毒，制备疫苗和重组蛋白。两种重组凝血因子Ⅷ，Bayer的Kogenate? FS、Aventis Behring的Helixate分别于1989和1994被FDA获准上市，1999年FDA批准Novo Nordisk的重组凝血因子VIIa（NovoSeven）上市，用于治疗血友病。 杂交瘤细胞：从小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞的融合细胞中分离获得杂交瘤细胞系，有SP2/O、J558L和NSO等。能在无血清培养基中高密度悬浮生长，容易转染和生长，能进行糖基化等加工修饰，大量分泌和高效表达。 哺乳动物细胞株系 ??????