第五章 酶学诊断PPT.ppt

2.酶活性浓度单位 临床上酶活性浓度采用每单位体积（升）所含的酶活性单位数表示，U/L。 连续监测法根据摩尔消光系数进行酶活性浓度的计算，公式如下： 3.参考值和正常上限倍数的应用 参考区间 不同的实验室由于条件各不相同有不同的参考值，对于仪器、试剂盒提供的信息都应经过实际验证和统计学处理，以决定是否采用 正常上限倍数 是把酶测定值转换为正常上限值的倍数，其意义在于可将不同方法、不同单位，测定值、参考值均不一致的结果进行比较 酶的异常以增加较为多见，因此不能以正常下限值作为倍数指数 (七)系数K值的计算及应用 K称为酶活性浓度定量系数 用于临床酶活性测定的计算与校正。 如LD活性浓度，已知NADH的?为6.22?103·cm-1.mol-1，血清量为50?l，底物液为1ml，比色杯光径为1cm，则 K=1.05?106/6.22?103?0.05?1=3376 K值高，线性范围宽，重复性差；精密度好，K值低，线性范围窄。 因此，K值设置时应考虑测定酶的参考上限值和测定时间 对于一些参考值较低的酶，可延长测定时间，K值可设置大一些，最简单的方法是增加稀释倍数。在实际工作中，结果会 受到仪器诸多因素的影响，应定期检查和实际测定指示酶的?和系数K（即仪器实测K值） （八）临床酶学测定的标准化 自学 二、酶质量测定 1、免疫化学法测定酶质量的原理 根据抗原抗体反应的原理，利用免疫化学技术，对一些不易测定或测定条件不易掌握的酶进行测定，可以提高检验的灵敏度 可以测定酶的活性和质量 2、测定方法 放射免疫测定（RIA）、免疫抑制法、化学发光免疫测定（CLIA）、酶免疫测定（EIA）、荧光酶免疫测定（FEIA）。 3、结果报告方式 （1）用酶活性浓度单位，结果以U/L表示。 （2）用质量浓度单位，结果直接用ng/ml或?g/L表示。 4、血清酶活性与酶质量的变化的关系 5、 免疫化学测定法的优点： ①灵敏度高，能测定样品中少量或痕量酶； ②特异性高，不受体液中其他物质的影响； ③能测定一些不表现酶活性的酶蛋白； ④特别适用于测定同工酶。 6、 免疫化学测定的局限性： ①制备足够量的提纯酶和抗血清非常困难且 工作量大； ②测定步骤多，操作繁琐； ③测定成本高。 三、同工酶的分析方法 方法 同工酶（或亚型）的性质差异 同工酶、亚型 电泳法 电荷不同 所有同工酶、亚型 色谱法 离子交换色谱 电荷不同 CK，LD 免疫分析法 ? 免疫抑制法 特异性抗体反应性不同 CK、LD、ACP 免疫化学测定法 特异性抗体反应性不同 CK、LD、ACP、ALP、AMY ACP 免疫沉淀法 ?特异性抗体反应性不同 ? 底物特异性分析法 底物Km、亲和力不同 ACP 、CK、LD（?-羟丁酸） 抑制剂分析法 对小分子量的抑制剂的特异性抑制不同 LD（草酸）、ACP（L-酒石酸）、ALP（L-苯丙氨酸） pH分析法 最适pH不同 LD、AST 热失活分析法 热稳定性不同 LD、ALP 蛋白酶水解法 对蛋白水解酶敏感度不同 LD、AST （一）电泳法 同工酶氨基酸组成不同，等电点不同。 简单快速、分离效果好，不会破坏酶的天然状态。 应注意巨球分子酶的形成 ①酶与免疫球蛋白形成复合物 ②酶与其他蛋白形成复合物 检测同工酶及其亚型的临床意义☆ 测定某一种或几种酶诊断疾病 组织分布、细胞内定位、发生发育方面都可能有所差异，可增加诊断的特异性. 例：CK，大量存在于三种肌肉组织中，单独总CK升高很难判断；骨骼肌CK-MM，平滑肌CK-BB，心肌CK-MB*。 三、工具酶 临床诊断工具酶：酶学分析作为试剂用于测定化合物浓度或酶活性的酶 最常用工具酶： 1.氧化酶系统（偶联H2O2的工具酶） 2.脱氢酶系统 氧化酶系统 原理 待检物质在相应的氧化酶的催化下，生成H2O2。 H2O2在以氢为受体的指示酶参与的指示反应中生成 有色物质 应用 广泛用于血清中葡萄糖、肌酐、尿酸、胆固醇、甘油三酯等化合物浓度项目的测定 脱氢酶系统 利用氧化-还原酶反应使其连接到NAD(P)-NAD(P)H的正/逆反应后，通过分光光度法或其他方法直接测定NAD(P)H的变化量。 （二）酶循环法 （enzymatic cycling methods） 是采用两种工具酶进行的循环反映，使被检物信号放大扩增，从而提高检测灵敏度的酶学方法，可用于检测微量的标本 6-磷酸葡萄糖 +NADP+ 6-磷酸葡萄糖