第十二章植物种植资源的离体保存PPT.pptVIP

植物种质资源的离体保存 ;知识要求 ;概念：种质：是决定生物遗传性状，并将遗传信息从亲代传递给子代的遗传物质。种质库：是指以种为单位的群体内的全部遗传物质，它有许多个体的不同基因所组成，又称基因库。种质资源：具有种质并能繁殖的生物体统称为种质资源或遗传资源。;植物种质资源保存具体方法很多， 大体可分为两大类。按保存的地理位置分为原地保存和异地保存（原生境保存和非原生境保存）。 一类是原境保存，为此建立自然保护区、天然公园或就地保护处于危险或受威胁的植物； 另一类是异境保存，为此需要建立各种基因库， 如种子园、种植园等田间基因库及种子库、花粉库等离体基因库。 ; 按照保存的具体方法 , 品种资源的保存可分为种植保存、贮藏保存、试管保存、基因文库保存。; ;;3、基因文库保存 利用DNA重组技术，将种质材料的总DNA或染色体所有片断随机连接到载体上，然后转移到寄主细胞中，通过细胞增殖，构成各个DNA片断的克隆系。;;野外保存植物种质资源需要大量的土地和人力资源， 成本高， 且易遭受各种自然灾害的侵袭。 种子库只能保存正常型种子，对于顽拗型、脱水敏感的种子和有性繁殖困难的植物则无能为力，而且种子库仅能保存基因，而不能保存特定的基因型材料。;4.种质资源的离体保存;意义：;缺点：;常用的离体保存方法有缓慢生长保存(slow growth conservation)和超低温保存(cryopreservation)。前者适合中短期保存， 后者用于长期保存。 ; （一）缓慢生长保存 ;1．降低培养温度;2 ．培养基中添加生长调节物质;3 ．提高培养基渗透压;4．适宜的光照强度;5．合适的包扎物;6．培养基的营养控制;7 ．降低培养环境中的氧气浓度;第二节 超低温保存 ;;超低温保存技术可极大地延长储存材料的寿命； 避免细胞和组织的染色体数目因长期继代而发生的变异； 避免了离体材料在长期无性繁殖过程中可能造成的退化和病虫侵害； 可有效、安全地长期保存那些珍贵稀有的种质。 ;二、超低温保存的研究概况;3. 超低温保存的植物种类 超低温保存已涉及到不同的植物种类，如野生及人工创造的谷类、豆类、薯类、油类、糖类、纤维类、蔬菜类、果树、树木、药用植物和藻类等。 ;超低温冷冻保存为什么没有把细胞冻死？ 细胞冰冻结冰保护性脱水理论 溶液的玻璃化理论;细胞冰冻结冰保护性脱水理论;溶液的玻璃化理论;提高超低温冷冻保存的措施;冷冻防护剂;常用的冷冻防护剂;非渗透型冰冻保护剂: 是聚合分子物质，能溶于水，但不能进入细胞，它使溶液呈过冷状态，从而起到保护作用。此类冰冻保护剂对快速、慢速冷却均有保护效果。 常见的： 聚乙烯吡咯烷酮(Polyvingyl pyrollidone, PVP) 葡聚糖(Dextrane) 聚乙二醇(Polyethylene glycol, PEG) 羟乙基淀粉(Hydroxyethyl starch, HES);四、超低温保存的方法;采用不同的降温冰冻方式进行冷冻，直至最后放入液氮中，并在液氮中停留至少1h； 保存后的化冻，一般采取在37～40℃温水浴中快速化冻； 材料化冻后的活力鉴定，进行再培养，观察恢复生长的速度及植株的再生能力，分析冻后材料或再生植株的遗传性状。 ;1. 材料的选择和预处理;为了使保存材料达到超低温保存所要求的生理特性，还要对材料进行预处理，总的原则是提高细胞分裂与分化的同步化，减少细胞内自由水的含量，增强细胞抗寒力。 目前主要有3种预处理方式： （1）低温锻炼 激活植物体内抗寒机制 （2）继代培养 增加有丝分裂细胞数目 （3）预培养 培养基中加冷冻保护剂或诱导抗寒力物质;2. 冰冻方法;（2）慢速冰冻法 采用逐步降温的方法，以0.5～2℃/min的降温速度，从0降到-30℃，-35或-40℃，随即投入液氮，或者以此降温速度连续降温到-196℃。逐步降温过程可以使细胞内水分有充足的时间不断流到细胞外结冰，从而使细胞内水分含量减少到最低限度，达到良好的脱水效果，避免细胞内结冰。这种方法适合于液泡化程度较高的植物材料，如悬浮细胞、原生质体等。;（3）分步冰冻法 此法将快速和慢速2种冰冻方法结合起来。首先用较慢的速度（0.5～4℃/min）使植物材料从0℃降至一定的预冷温度（一般为-40℃）并停留一段时间（一般10min左右），使细胞进行适当的保护性脱水，然后再浸入液氮冷冻。 （4）逐级冰冻法 植物材料经过冷冻保护剂0℃预处理后，逐级通过-10，-15，-25，-35，-40℃等，每个温度停留10 min左右，然后浸入液氮。;（5）干燥冰冻法 将样品在含高浓度渗透性化合物（如甘油、糖类物质等）培养基上培养一段时间，或者经硅胶、无菌空气干燥脱水数小时，或者用褐藻酸钙液泡包裹样