第四章 噬菌体PPT.pptVIP

黑龙江中医药大学 微生物学与免疫学教研室 王 垚 联系方式：yaoyao_05@ 噬菌体(bacteriophage, phage) 掌握：1、噬菌体的概念 2、噬菌体感染细菌的 结果 熟悉：生物学性状 了解：噬菌体的应用 内 容 与 要 求 噬菌体：是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物的病毒。 噬菌体的特点： 形态 抗原性 特异性 分布广泛 一、概 述 二、噬菌体的增殖和溶菌 溶菌周期 毒性噬菌体（virulent phage） 能在宿主菌细胞内复制增殖，并最终裂解细菌，称为毒性噬菌体 溶原周期 温和噬菌体（temperate phage） 噬菌体感染细菌后不增殖，不裂解细菌，其基因与宿主菌染色体整合，不产生子代噬菌体，但噬菌体DNA能随细菌DNA复制，并随细菌的分裂而传代 T4 bacteriophages infecting E.coli. 噬菌体 噬菌体的复制 温和噬菌体 溶原性细菌 前噬菌体 溶原性细菌 溶原周期 溶菌周期 溶原周期 三、噬菌体的应用 细菌的鉴定 噬菌体与宿主菌的关系有高度特异性，可用于未知细菌的鉴定和分型。如应用伤寒沙门菌Vi噬菌体可将有Vi抗原的伤寒沙门菌分成96个噬菌体型。 分子生物学研究的重要工具 噬菌体基因数量少，结构比细菌和高等细胞简单得多，而且容易获得大量的突变体。 λ噬菌体可用来构建基因文库 基因工程载体 噬菌体展示技术 细菌感染的诊断与治疗 应用噬菌体效价增长试验可检测标本中的相应细菌。在怀疑有某种细菌存在的标本中，加入一定数量的已知噬菌体，37℃孵育6~8h，再测定该噬菌体的效价。 辅助治疗，如应用铜绿假单胞菌噬菌体治疗创口感染。 特征： 1.正常分裂，并将前噬菌体传给子代细菌（溶原状态） 2.前噬菌体能抑制细菌内的相应毒性噬菌体的生物合成，使细菌免遭裂解 3.某些前噬菌体可导致细菌基因型和性状发生改变，称为溶原性转换(lysogenic conversion)。 4.溶原状态终止 前噬菌体丢失或脱离宿主菌基因组而进入溶菌周期 溶原状态 十分稳定，能经历许多代 在某些条件如紫外线、X线、致癌剂、突变剂等作用下，可中断溶原状态进入溶菌性状态，这称为前噬菌体的诱导与切离，发生率为10-2-10-5。 极少数溶原性细菌中的前噬菌体离开细菌基因组后，不进入溶菌性周期，这个现象被形象地称之为“治愈”。 溶原性转换（lysogenic conversion） 某些前噬菌体可导致细菌基因型和性状发生改变，称为溶原性转换 。 白喉棒状杆菌产生白喉毒素，是因其前噬菌体（β-棒状噬菌体）带有毒素蛋白结构基因（tox基因）。 A群溶血性链球菌受有关温和噬菌体感染发生溶原性转换，能产生致热外毒素。 肉毒梭菌的毒素、金黄色葡萄球菌溶素的产生，以及沙门菌、志贺菌等的抗原结构和血清型别都与溶原性转换有关。 2.化学组成 蛋白质 构成噬菌体的头部的衣壳及尾部，包括尾髓、尾鞘、尾板、尾刺和尾丝，起着保护核酸的作用，并决定噬菌体外形和表面特征。 核酸-遗传物质 基因组大小2-200Kb 核酸为DNA或RNA，大多数噬菌体的DNA为双链DNA，但一些微小DNA噬菌体的DNA为环状单链。多数RNA噬菌体的RNA为线状单链，少数为线状双链，且分成几个节段。 某些噬菌体的基因组含有异常碱基，如大肠埃希菌T2噬菌体无胞嘧啶，而代以5-羟甲基胞嘧啶与糖基化的5-羟甲基胞嘧啶；某些枯草芽胞杆菌噬菌体无胸腺嘧啶，而代以尿嘧啶、 5-羟甲基尿嘧啶。因宿主细胞内没有这些碱基，可成为噬菌体DNA的天然标记。 5.抵抗力 比一般细菌的繁殖体强 抵抗乙醚、氯仿和乙醇 75℃ 30min或更久才能被灭活 耐受低温和冰冻 但对紫外和X射线敏感，一般经紫外照射 10-15min即失去活性。 毒性噬菌体在敏感菌内以复制方式进行增殖，增殖过程包括：吸附、穿入、生物合成、成熟和释放。 噬菌体的复制周期或溶菌周期：从噬菌体吸附至细菌溶解释放出子代噬菌体的过程。 毒性噬菌体 吸附 是噬菌体与细菌表面受体特异性结合的过程，特异性取决于噬菌体蛋白与宿主菌表面受体分子结构的互补性。 吸附方式 丝形噬菌体以其末端吸附，有尾噬菌体以尾丝、尾刺吸附。 丝形噬菌体如M13，f1等及微球形噬菌体如MS2等是吸附在性菌毛上，所以只感染有性菌毛的F+菌。 只要细菌有特异性受体，不论死活噬菌体都能吸附，但噬菌体不能进入死亡的宿主菌。 穿入 有尾噬菌体吸附宿主后，借助尾部末端含有的一种类似溶菌酶的物质，在细菌细胞壁上溶一小孔，然后通过尾鞘的收缩，将头部DNA注入细菌体内