第四章 植物组织和器官培养PPT.ppt

第四章 植物组织和器官培养 第一节 植物脱毒与快速繁殖 快繁（rapid propagation）或微繁（micropropagation）技术：利用组培进行快速营养繁殖的技术。 快繁的应用： 1、杂合植物材料的大量繁殖。 2、脱毒种苗生产 3、加速繁殖数量有限的特殊种质材料 4、单独繁殖雄株或雌株 快繁的发展史1 ☆20世纪40年代，中国罗士韦世界上最早研究茎尖培养，之后Ball由茎尖获得植株 ☆1952，Morel和Martin 通过茎尖培养获得无病毒大丽花 ☆1960，Morel获得无病毒兰花 此后在欧美国家出现以茎尖培养为基础的兰花、马铃薯和草莓等植物的脱毒试管苗工厂，形成最早的植物细胞工程产业。 快繁的发展史2 ☆我国脱毒快繁产业： ◆20世纪70年代，罗士韦和崔瀓，率先开展经济植物脱毒茎尖培养研究。 ◆中科院植物所陶国清、陈维伦分别建立了马铃薯和苹果的茎尖培养技术 ◆中科院上海植物生理研究所王熊等开展了兰花和无籽西瓜的快繁研究，并建立了甘蔗的组织育苗技术。 在以下植物上取得重要进展：香蕉、马铃薯、甘蔗、木薯、香荚兰、草莓、柑橘及其砧木、苹果及其砧木、葡萄、造林树种和经济林木、花卉及观赏植物 一、 植物快繁的途径与方法技术 ★利用芽和茎尖培养进行快繁 ◇选取只带1～2个叶原基的生长点进行脱毒。 ◇双子叶植物常用MS培养基，单子叶植物常用 B5培养基。 ◇经验：大量元素减半，不加肌醇并将VB1提高至1mg/L的1/2MS 适合于大多数植物的茎尖培养。 WPM（Wood Plant Medium）：专为木本植物茎尖培养设计 外植体褐变 褐变原因:植物中含有多酚，创伤会激活多酚氧化酶，将多酚氧化为棕褐色的醌类，使得外植体切口发生褐变，并渗透入培养基，严重影响培养物的生长和分化，甚至致其死亡。 影响褐变因素：木本植物外植体易褐化，尤其成年树；培养基中过高浓度的无机盐和肌醇会加剧褐变；6-BA和KT有诱导褐化作用；强光和高温会促进褐化。 外植体褐变防治 1、选取酚类含量低的实验材料 2、选择无机盐含量低，不加肌醇的培养基 3、在弱光线或黑暗条件下培养 4、培养基中加入抗氧化剂：Vc、柠檬酸、半胱氨酸、二硫苏糖醇和聚乙烯吡咯烷酮（PVP)。 5、在培养基中加入0.5%~1%活性炭，吸附醌类，注意同时提高培养基中激素浓度。 6、不断地更换新培养基 腋芽的生长与增殖 ★一般使用细胞分裂素打破顶端优势，促使腋芽萌动。 ★顶端优势不被细胞分裂素打破的植物，如葡萄，可用切段法繁殖。 ★腋芽增殖的最大优点：培养物不易变异，可长时间大量提供遗传同质的试管苗 ★低温处理有时有促进腋芽萌动和增殖作用 诱导生根 ☆有些植物在无激素基本培养基上即可生根 ☆木本植物则在生根培养基上才能生根，常用生长素：NAA IBA IAA， 0.1~10mg/L ☆经验：1/2 MS、White、WPM、Anderson培养基可用于试管苗生根。 铵态氮含量低的N6、B5利于生根。蔗糖浓度降低，可促进试管苗自养。 移栽 试管苗先在强光和较低温度下生长一段时间，根刚长出时移栽最合适。 先在温室过渡培养。 利用植株再生技术进行快繁 再生植株方式3种： 1、外植体直接产生不定芽 2、外植体产生愈伤，转移培养后产生胚状体，再生植株 3、外植体产生愈伤，转移培养后分化芽，再生植株。 外植体直接产生不定芽 不定芽：顶芽和腋芽以外任何其它器官或组织产生的芽 不定芽形成的个体形态和遗传相同。 愈伤组织产生胚状体 ※诱导胚状体形成时，一般使用胚、分生组织和花药组织作为外植体。 ※先诱导外植体轻微的愈伤化，再转移到胚状体诱导培养基上。 ※双子叶植物：MS适合 ※单子叶，尤其禾谷类：附加1400～2000mg/L 脯氨酸的N6基本培养基比较理想。 ※2,4-D非常重要：高浓度诱导愈伤，低浓度（或不加）诱导胚状体。 优点：繁殖系数高，双极性，无需生根。控制好胚状体发生和生长的同步性，诱导休眠，制造人工种子是最理想的快繁方法。 缺点：会有少量变异株 愈伤组织分化芽和植株 最严重问题：细胞在遗传上的不稳定性，再生植株较高频率的无性系变异 另一缺点：随着继代，植株再生能力下降直至丧失。 尽量避免这种方法。 二、 组培脱毒快繁技术 茎尖脱毒原理：病毒通过植物的维管束和细胞壁上的胞间连丝扩散到所有的组织和器官，但植物茎尖分生组织由分生细胞构成，分生区域内无维管束，细胞壁的胞间连丝也不发达，病毒很难进入，所以生长点往往不含病毒或含极少量病毒，因此采用茎尖可进行脱毒快繁。 茎尖培养脱毒技术 ★一般选取带1～2个叶原基的顶端分生组织培养。 ★生长