细胞分化-细胞生物学-课件2-13PPT.ppt

细胞治疗cell therapy 细胞治疗是指将正常或遗传改造过的人体细胞直接移植或输入患者体内，以达到替代受损细胞、治疗疾病的目的。利用干细胞及其分化细胞进行细胞治疗是干细胞临床应用的重要研究方向。 胚胎干细胞和成体干细胞都能用于细胞治疗，但目前只有少数成体干细胞在细胞治疗上己开始取得临床疗效，大多数的干细胞治疗还在实验阶段。 血液病的细胞治疗 如白血病的细胞治疗 造血干细胞移植： 自体移植（脐带血造血干细胞） 无排斥反应 同系移植（同卵孪生之间骨髓 造血干细胞） 一般无排斥反应 同种移植（人与人之间骨髓造血干细胞） 有排斥反应（供、受者组织相容性抗原不同） 需组织配型、选择供者（骨髓库）； 抑制受者的免疫应答、诱导免疫耐受。 神经系统疾病的细胞治疗 如帕金森氏病细胞治疗 胚胎干细胞细胞移植 神经干细胞细胞移植 1、干细胞直接移植 2、诱导分化成相应神经细胞（多巴胺能神经元）后进行细胞移植 心肌疾病的细胞治疗 如心肌梗塞的细胞治疗 胚胎干细胞 诱导分化成心肌细胞 细胞移植 成体干细胞（骨髓基质干细胞、脂肪干细胞、心肌干细胞等） 诱导分化成心肌细胞 细胞移植 干细胞治疗中的难点 异体移植的免疫排斥反应 解决途径：自身体细胞核移植（治疗性克隆） 干细胞基因改造 采用自身干细胞 成瘤性的危险 胚胎干细胞植入动物体内会形成畸胎瘤，如何防止干细胞移植后可能因分化不彻底形成肿瘤，是必须解决的问题。 解决途径：完善定向诱导分化方法 改进筛选纯化技术 治疗性克隆（体细胞核移植） 我们实验室的一项工作 胰腺干细胞的 β 细胞分化 与 I 型糖尿病的干细胞治疗 基因芯片实验设计和过程 去甲基化处理48 h 后 ES 细胞在没有滋养层细胞条件下培养 1μM 甲基化转移酶抑制剂 5-Azad-2’-deoxycytidine处理 RNA 准备: 新鲜抽提组织 用RNA 600 Nano LabChip质检 cRNA的准备: 扩增率, 20 电泳 芯片杂交测试 基因芯片: 均一的背景 良好的整体信号 杂交阳性对照 GAPDH, ?-actin 3’/5’ 信号 组内可重复性 数据收集: 高严谨性 标准化 (TGT, GAPDH) 去甲基化 Demethylation-induced changes of gene expression in mouse ES cells 2,032 2,003 Up-regulated genes by DNA demethylation- Down-regulated genes by DNA demethylation- 16 12 8 4 0 -4 mRNA Ratio Changed Dnmt2 Pax6 H19 IGF2R Dnmt3b 1.基因组合调控产生多种调节模式 组合调控（combinational control） 一些基因调节蛋白通过一定的组合形成一系列的调节模块，依次结合到调节序列上，在正确的时间和空间，表达正确的基因模式。该机制可以使为数不多的基因调节蛋白产生众多的细胞类型。 基因组合调控对发育的重要作用 二、基因调节模式的遗传 和细胞记忆 与特化细胞的特征形成有关的基因 调节模式及染色体结构变化是可以 遗传的。 正反馈环的遗传机制 三、基因表达的调节是多水平的 真核细胞基因表达调节的多重性 四、细胞质的作用 胞质记忆 由细胞质中的成分直接或间接作用于基因组，使得特定的基因被选择性表达的现象。 第四节 细胞分化与肿瘤 肿瘤发生是细胞去分化或分化阻断的结果，其分子基础是基因突变或表达异常。 一、分化异常与肿瘤 肿瘤起源于一些未分化或微分化的干细胞，主要表现出增