10 维生素的测定_PPT课件.pptVIP

（2）维生素A标准浓度的标定：取维生素A标准液10.00μL，用乙醇稀释至3.00mL，在325nm波长处测定其吸光度值。用比吸光系数计算出维生素A的浓度。 式中： X—维生素A的浓度； ?—维生素A的平均紫外吸光值； 1835—维生素A（1％）比吸光系数； K—标准稀释倍数 （三）仪器 1、实验室常用仪器 2、分光光度计。 3、回流冷凝装置。 （4）于“标准空白”及“试样空白”中各加5mL硼酸-乙酸钠溶液，混合摇动15min，用水稀释至100mL，在4℃冰箱中放置2h～3h，即得“标准空白”及“试样空白”溶液，取出备用。 （5）于“试样”及“标准”中各加5mL 500g/L乙酸钠溶液，用水稀释至100mL，即得“试样”溶液及“标准”溶液（10μg/mL），备用。 3、标准曲线的制备 取上述“标准”溶液（抗坏血酸含量10μg/mL）0.5mL、1.0mL、1.5mL和2.0mL标准系列，分别置于10mL带盖试管中，再用水补充至2.0mL。 4、荧光反应 取“标准空白”溶液、“试样空白”溶液及“试样”溶液各2mL，分别置于10mL带盖试管中，连同标准系列，在暗室迅速向各管中加入5mL邻苯二胺溶液，振摇混合，在室温下反应35min，于激发光波长328nm、发射光波长420nm处测定荧光强度。标准系列荧光强度分别减去标准空白荧光强度为纵坐标，对应的抗坏血酸含量为横坐标，绘制标准曲线或进行相关计算。 （五）结果计算 式中： X—试样中抗坏血酸及脱氢抗坏血酸总含量，mg/100g； C—由标准曲线查得或由回归方程算得试样溶液浓度，μg/mL； m—试样质量，g； V—荧光反应所用试样体积，mL； F—试样溶液的稀释倍数。 1、本法适用于蔬菜、水果及其制品中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。本法检出限为5μg/mL～20μg/mL。 2、影响荧光强度的因素很多，各次测定条件很难完全再现，因此，标准曲线最好与样品同时做。 （六）说明 四、2，4-二硝基苯肼法 GB/T 5009.86-2003蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定（第二法） （一）原理 总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮乐古糖酸。试样中的还原型抗坏血酸经酸性活性炭氧化为脱氢型抗坏血酸，再与2，4-二硝基苯肼作用，生成红色的脎。脎的量与总抗坏血酸含量成正比，将红色脎溶于硫酸后进行比色，由标准曲线计算试样中总抗坏血酸含量。 （二）试剂 1、4.5mol/L硫酸和85%硫酸 2、2，4-二硝基苯肼溶液（20g/L）：溶解2g 2，4—二硝基苯肼于100mL 4.5mol/L硫酸溶液中，过滤。不用时存于冰箱内，每次用前必须过滤 3、草酸溶液（20g/L与10g/L） 4、硫脲溶液（10g/L与20g/L ）：溶解5g（10g）硫脲于500mL上述草酸溶液（10g/L）中 5、1mol/L盐酸溶液 6、VC标准溶液：称取100mg纯VC溶解于100mL草酸溶液（20g/L）中。此溶液每毫升相当于1mg VC 7、活性炭 （三）仪器 1、恒温箱：37℃±0.5℃； 2、可见-紫外分光光度计； 3、捣碎机 （四）操作方法 1、试样制备（全部实验过程要避光） （1）鲜样制备：称取100g鲜样及吸取100mL 20g/L草酸溶液，倒入捣碎机中打成匀浆。取10～40g匀浆（含1～2mg抗坏血酸）转移到100mL容量瓶中，用10g/L草酸溶液稀释至刻度，混匀。 （2）干样制备：称取试样1g～4g（含1mg～2mg抗坏血酸）放入乳钵内，加入10g/L草酸溶液磨成匀浆，转入100mL容量瓶内，用10g/L草酸溶稀释至刻度，混匀。 （3）液体试样：直接取样（约含1mg～2mg抗坏血酸）用10g/L草酸溶液定容至100mL。 将①②试样溶液过滤，滤液备用。不易过滤的试样可用离心机离心后，倾出上层清液，过滤，备用。 2、氧化处理 吸取25mL上述滤液于锥形瓶中，加入活性炭2g，振摇1min，过滤。弃去数毫升初滤液。取10mL此氧化提取液，加入10mL 20g/L硫脲溶液，混匀，此试样为稀释液。 3、呈色反应 （1）于三个试管中各加入4mL氧化处理后的稀释液，一个试管作空白，在其余试管中加入1.0mL 2，4-二硝基苯肼溶液（20g/L），将所有试管放入37℃±0.5℃恒温箱或水浴中，保温3h。 （2）3h后取出，除空白管外，将所有试管放入冰水中。空白管取出后使其冷到室温，然后加入1.0mL 2，4-二硝基苯肼溶液（20g/L），在室温中放置10min～15min后放入冰水内，其余步骤同试样。 4、85%硫