标免1107蛋白偶联信号分析.pdf

蛋白偶联信号分析 (Protein-coupled signal assay) Reporter gene Proteintag 李迺昶 Dr Naichang Li MD. MSc. PhD. A cell undergoing mitosis 报告基因 （Reporter gene ）是一种编码非常容易被 检测的蛋白质或酶的基因。它的编码序列和基因表 达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其它目的基 因相融合，在调控序列控制下进行表达，从而利用 它的表达产物来表示目的基因的表达调控。 蛋白标签 （Proteintag ）是指利用DNA体外重组技术， 与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以 便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。 Aims: Gene expression and Cell signaling Tags •Luciferase tag 荧光素酶标签: 荧火虫荧光素酶(firefly luciferase) 海肾荧光素酶(Renilla reniformis) •Fluorescent protein tag 荧光蛋白标签 绿色荧光蛋白(Green Fluorescent protein，GFP） • Enzymatic tag 酶活性标签: Secreted alkaline phosphatase (分泌型碱性 磷酸酶，SEAP） -galactosidase 半乳糖苷酶 •Antigenic tag 抗原性标签 电位敏感荧光蛋白(VSFPs) voltage-sensitive fluorescent proteins  光遗传学（optogenetics ）技术，是指将光学技术 与遗传学技术相结合，在动物体内针对神经系统开 展研究的技术，这项技术能帮助科学家们分析研究 几乎所有类型的神经细胞，比如大脑的嗅觉，视觉 ，触觉，听觉细胞等，开辟了一个新的研究领域。  利用来自绿藻的光敏感通道（channelrhodopsin ） 基因，电位敏感荧光蛋白VSFP2.3/2.42 荧光素酶与荧光蛋白 荧光生成： 荧光素+ ATP →荧光素化腺苷酸 + PPi （luciferyl adenylate ） 荧光素化腺苷酸+ O2 →氧荧光素+ AMP + 光 荧光蛋白：是指在特定波长的激光照射下就会在 另一个波长上发光的特殊蛋白质。这些蛋白已被 作为一种新型的探针广泛应用于生物学的研究。 Recombinant proteins and Cell Signaling Purification Expression Receptor activity Protein folding conformation Subcellular localization Intracellular signaling processing 胰高血糖素受体 AC-cAMP-PKA通路转导信号 核因子F- κ B 途径是重 要的炎症和 应激反应信 号分子 (一)重组DNA技术 1973年 美国斯坦福大学的科学家构建第一 个重组DNA分子。 1977年 美国南旧金山由博耶和斯旺森建立 世界上第一家遗传工程公司，专门应