食品毒理学·体外实验和新技术在毒理学中应用.ppt

第十六章 体外试验与新技术在毒理学中的应用 第一节 细胞毒理学 第二节 分子毒理学 第三节 新技术在毒理学中的应用 第一节 细胞毒理学 一、概念 细胞毒理学是研究外源性有害因子包括物理(电离辐射)、化学和生物(病毒)因子对生命细胞损伤作用规律，探讨毒作用机制，并对其作出危险评估的一门方法学，它是毒理学的一个重要分支。 细胞毒理学方法特点 (1)操作简便、实验花费少； (2) 可以在细胞存活的状态下，观察靶细胞对有害因子的细微的结构与功能的变化，分析评价其作用机理和量效关系； (3)实验条件易于控制，实验重复性好，结果稳定且易于观察； (4)避免个体的差异。 二、研究内容、现状及展望 (1)研究外源性有害因子对机体的细胞毒性作用及特异细胞毒作用 (2)研究细胞毒物代谢 (3)研究毒物的细胞毒效应作用机制 (4)研究外源性有害因子的致癌作用 (5)进行药物筛选 第二节 分子毒理学 一、概念 分子毒理学正是要研究外源化合物对生物大分子结构和功能的负面影响，从而从本质上阐明毒性的机制。 分子毒理学是在毒理学的发展过程中，受到分子生物学理论和技术的促进而发展起来的，它是从分子水平上研究外源化合物与生物机体相互作用的一门学科。 二、分子毒理学现状 随着分子生物学的迅猛发展，分子毒理学成为近年来毒理学领域进展最快的分支学科，研究进展迅速。 分子生物学新技术： 基因重组和克隆技术 核酸杂交技术 PCR技术 DNA测序技术 以及一系列突变检测技术 三、分子毒理学展望 随着物理、化学、数学、信息科学、环境科学和生物医学互相渗透，特别是分子生物学新概念和新技术的发展； 随着人类基因组计划快速发展和环境基因组计划(EGP)的顺利进行； 差异显示技术、荧光原位杂交技术、流式细胞计技术单细胞凝胶电泳以及穿梭质粒、转基因动物和转基因细胞等得到了充分的开发和应用，将为毒理学工作者提供全新的概念和技术，也为分子毒理学的研究带来新的启迪和前所未有的机遇。 三、基因差异分析技术 消减文库筛选和差异杂交是师选两组分子间差异基因的常规方法。mRNA差异显示和代表性差异表达分析是基于PCR技术，很灵敏的检测差异表达基因的方法。 SAGE是通过快速和详细分析成千上万个表达序列标签来寻找出表达丰度不同的SAGE标签序列。 电子消减则是通过比较相同基因的cDNA文库中被重复测序出现次数，可以粗略推算出该基因在不同文库中的丰度差异。 四、荧光原位杂交技术 荧光原位杂交（FISH）是指通过荧光标记的各类DNA和RNA探针与细胞或组织进行杂交，在不改变其结构和分布格局的情况下，进行细胞内DNA、RNA某特定序列的测定的一种方法。 五、基因芯片技术 利用大规模集成电路的手段控制固相合成成千上万个靶基因或寡核苷酸探针，并把它们有序地、高密度地(点与点之间的距离小于500μm)排列在玻璃或硅片等不同载体上。 一块基因芯片相当于一个集成处理器，其中的每个探针相当于一个探头，能对相关的大量信息实现同时、自动和快速的采集传输、分析和处理，给出相应的检测、诊断结果。 六、转基因动物试验 转基因动物是指一类动物的基因组中整合有外源目的基因。通过转基因技术，将改建后的目的基因或基因组片段导入实验动物的受精卵，使其与受精卵DNA发生整合。然后将此受精卵转移到雌性受体的输卵管或子宫中，使其顺利完成胚胎的发育。 (1)受精卵的微注射技术 (2)胚胎干细胞介导技术 (3)反转录病毒载体法 (4)其它 动物转基因技术还有脂质体介导法、电脉冲介导法、原生殖细胞介导法、细胞融合法等。 七、流式细胞术 流式细胞仪(FCM)是一项集激光技术、电子物理技术、光电测量技术以及细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器。 流式细胞仪的原理是把根据目的细胞特有的表面标志标记后的悬液中单细胞依次通过测量区，当每个细胞通过测量区时产生电信号，这些信号可以代表荧光、散射光、光吸收或细胞的光阻抗，于是细胞的一系列重要的物理特性和化学特性就被快速地、大量地测定。 流式细胞术毒理学中的应用 1．淋巴细胞分型及鉴定． 2．T细胞活化信息传递研究 3．DNA含量与细胞周期分析 4．细胞凋亡检测技术 思 考 题 1．细胞毒理学研究哪些内容？ 2．分子毒理学研究有哪些进展? 3．单细胞凝胶电泳技术的基本原理？ 4．基因芯片技术在毒理学研究中有哪些应用? 5．流式细胞仪的工作原理是什么? * * 芯片技术可以用于毒物的筛选及毒作用机制的研究、确定单独的或混合的毒性物质的遗传毒性，并测定低剂量下的毒性影响。 在评价毒性机制及剂量效应关系时，基因芯片可以评价模型系统、通过体内和体外实验去比较基因表达的变化，用已知毒性物质处理，如多环芳烃、生殖毒素、氧胁迫和雌激素化合物，毒性物质导致的信号响应将改变基因芯