VEGF-B基因靶向siRNA对人肝癌细胞HepG2细胞裸鼠皮下种植瘤的影响［PPT课件］.pptVIP

VEGF-B基因靶向siRNA对人肝癌细胞HepG2细胞裸鼠皮下种植瘤的影响 导 师 唐瑞峰 教授 研究生 吴剑飞 河北医科大学第四医院肝胆外科 前 言 原发性肝癌与VEGF-B 最常见的恶性肿瘤之一，发病率升高，恶性程度高，进展迅速，易侵袭、转移、复发。 肿瘤生长和转移依赖于肿瘤血管新生。 血管内皮生长因子家族成员(vascular endothelial growth facter family members, VEGFs)是影响肿瘤血管新生的关键因子之一。 VEGF-B是VEGF家族新成员， 在原发性肝癌等恶性肿瘤中存在高表达，目前研究表明VEGF-B可协同VEGF-A和其他血管生成因子，在肿瘤血管新生中发挥作用，但具体机制仍知之甚少。 siRNA 1998年由Fire等人首次提出。概念：一种由双链RNA (double-stranded RNA, dsRNA)诱导的抗双链反应， 进而导致序列特异性的基因沉默 。 一种由20多个核苷酸组成的短片段双链RNA分子，按同源互补序列的mRNA为标靶从而使特定的mRNA降解。这种在转录后水平抑制基因表达的机制被称为RNAi机制 。 一种研究基因功能的利器，目前广泛应用于医学遗传学、分子生物学、疾病基因治疗等各方面的研究 。 肿瘤基因治疗的新思路：siRNA。 siRNA在恶性肿瘤基因治疗中的优点：高效性；高特异性；高稳定性。 材 料 与 方 法 材料 人肝癌细胞株HepG2细胞，由河北医科大学第四医院科研中心提供 。 雌性无胸腺裸小鼠(4~5周龄，SPF级),购于中国医学科学院动物研究所(动物合格证号：0240722)，在河北医科大学第四医院动物实验中心无特定病原菌(SPF)级条件饲养。 细胞培养试剂 DMEM培养基 GIBCO公司 胎牛血清(FCS) 杭州四季青公司 胰蛋白酶(trypsin) 美国Sigma公司 PBS液 参照《细胞培养》 二甲基亚砜(DMSO) 天津市化学试剂厂 试剂 VEGF-B靶向siRNA表达载体质粒 Invitrogen公司 LipofectamineTM 2000 Invitrogen公司 杀稻瘟菌素(blasticidin) Invitrogen公司 OPTI-MEM GIBCO公司 基因转染试剂 RNA提取和RT-PCR试剂 dNTP Invitrogen公司 M-MLV Invitrogen公司 Oligo Invitrogen公司 5×第一链合成缓冲液 Invitrogen公司 溴酚兰 Invitrogen公司 β-actin引物 Invitrogen公司 VEGF-B引物 Invitrogen公司 TRIquick试剂 Solarbio公司 氯仿 北京化学试剂厂 异丙醇 北京化学试剂厂 乙醇 北京化学试剂厂 焦碳酸乙二酯(DEPC) 美国Amresco公司 琼脂糖 美国promega公司 DNA Maker(1100) 美国