喜树植物内生真菌.docVIP

abstract 亚氯酸钠（SC）是众所周知的微生物抑制剂，最近对鲜切产品的酶促褐变抑制作用强。我们调查了SC对多酚氧化酶（PPO）及其底物，绿原酸（CA）的影响，因为与酶促褐变抑制的机制有关。结果表明，PPO催化的CA（1.0mM）的褐变反应（33U /mL）在pH 4.6下被1.0mM SC显着抑制。 通过天然聚丙烯酰胺鉴定了两种PPO同种型凝胶电泳，两者都被SC（3.0mM）灭活。 这表明SC作为一种PPO抑制剂以防止酶促褐变。 此外UV-Vis扫描和LC-MS分析，也研究了SC对CA的稳定性在酸性（pH 4.5）和碱性条件（pH 8.3）的影响。结果表明，在SC（3.0mM）存在下，CA（0.1mM）降解为奎尼酸和咖啡酸以及其他中间体。 因此，SC的抗褐变性可归因于两个作用方式：直接灭活多酚氧化酶和氧化降解酚类底物。 Introduction 酶促褐变是广泛发生在水果，蔬菜和茶叶的色彩反应。褐变反应需要 氧，酚类化合物和多酚氧化酶（PPO），通常由酶催化将单酚氧化成邻二酚和邻二酚醌，其进行进一步的非酶聚合导致褐色的形成。 虽然酶促褐变有利于某些食物的颜色和味道的形成，例如茶，咖啡和可可等物品，但是会损害各种鲜切水果和蔬菜的品质和销售，如莴苣，马铃薯，苹果，梨，香蕉和桃，在加工过程中易于发生酶促褐变。广泛的研究专注于通过瞄准来控制褐变PPO，底物（氧和酚）或最终产物褐变反应。 基于工作机制，褐变抑制剂可以分为六组，包括还原 药剂，酸化剂，螯合剂，络合剂，酶处理和酶抑制剂。在所有测试的抑制剂中，还原剂，例如抗坏血酸酸及其衍生物，半胱氨酸和谷胱甘肽有效控制褐变，并且抗坏血酸钙配方已在鲜切苹果产业广泛应用。 与目前使用的还原剂比较的主要缺点是那些还原剂通常与被广泛应用于鲜切行业、以防病原体污染的消毒剂不相容， 因为大多数消毒剂如氯，臭氧和二氧化氯本质上是具有氧化性的。由于褐变控制解决方案经常是从一批到一批苹果重复使用，缺乏适当的消毒处理可能会导致潜在的食源性人类病原体引起污染 。其实是最大的美国的鲜切产品加工商最近经历了一个由于检测出单核细胞增生利斯特氏菌，对其产品进行了昂贵的回收。保持安全和新鲜苹果的质量，一种能兼容目前广泛使用的消毒的褐变抑制剂或许更好。需要褐变反应和微生物生长双重控制的解决方案迫切需要。 酸化的亚氯酸钠（ASC）是最近FDA批准的浸渍和喷雾处理食品的消毒剂，包括新鲜鲜切的水果和蔬菜，并表现出强烈控制鲜切胡萝卜和香菜的病原体的能力。亚氯酸钠（SC）是ASC的主要成分，对人类致病菌具有很强的抗微生物能力，陆，罗，冯，Turner（2007）报道，SC强烈抑制酶促在鲜切的苹果上变褐。由于其在褐变中具有双重作用抑制和病原体灭活，SC可能具有潜力成为鲜切行业所需食品质量安全的双重控制措施。有趣的是，SC是一个氧化剂，迄今为止，没有报道酶褐变氧化过程，可以通过氧化来抑制。虽然罗露和Feng（2006）提出SC有一个混合（竞争性和非竞争性）类型抑制作用，SC对PPO和底物的影响尚未得到充分研究。这里，SC防止酶促的工作机制正在研究，其中绿原酸和酪氨酸酶被用来模拟鲜切苹果的褐变反应。 Materials and methods 2.1.Reagent 绿原酸（CA），亚氯酸钠（SC），儿茶酚和蘑菇，酪氨酸酶（EC.1.14.18.1,3320U / mg）来自Sigma Chemical CO。 一系列试剂，包括CA（1.0,10.0mM），酪氨酸酶（3300U / mL）和SC（3.0，5.0,10.0,15.0,20.0,30.0, 50.0mM）在乙酸缓冲液中制备（0.2M，pH4.6）。 用于所有实验。 预聚丙烯酰胺凝胶（10％），与运行缓冲液（Tris-Glycine，pH 8.3）一起进行电泳，购自Bio-Rad Laboratories（Hercules，CA）。 甲酸（质谱级），氨（HPLC等级）和乙腈（Optima *等级） 所有其他化学品都是分析级。 去离子蒸馏水用于制备所有溶液，和Optima *级水（Fisher Scientific）用于移动LC / MS分析。 2.2.Inhibition of enzymatic browning by sodium chlorite 绿原酸和酪氨酸酶分别作为底物和酶，以模拟酶促褐变过程。实验通过连续添加1.0mL CA，1.0mL SC（5.0,10.0或30.0mM）和0.1mL酪氨酸酶（3300U / mL）加入到含有7.9mL乙酸盐缓冲液（0.2M，pH 4.6）。 反应混合物中的最终浓度为CA，1.0mM，酪氨酸酶，33U / mL和SC，0.5,1.0或3.0mM。该混合液立即进行UV分析，并记录吸光度随时间的变化。 在波长400nm下，使用S