叶绿素提取和分离实验的改进.docVIP

叶绿素提取和分离实验的改进 “叶绿体中色素的提取和分离”实验，是高中生物教学中的一个重要实验，人教版普通高中老、新版教材均将其列为必做实验之一。该实验包括两项内容，一是叶绿体中色素的提取，即为下一步色素的分离准备材料；二是采用纸层析法分离提取液中的各种色素。但是本实验过程复杂，完全按课本中的实验方法去做, 学生往往因操作不当很难达到预期目的。如果对实验上的操作做出一些改进创新，应该能提高实验的成功率。 叶材料的选取 书本上的方法是取绿叶5g剪碎于研钵中, 加少许二氧化硅和碳酸钙, 再加10ml无水乙醇, 研磨、过滤后即为色素提取液。采用这种方法, 滤液提取困难, 提取出来的滤液色素含量低, 造成分离的色素带清晰度差。 改进办法是恰当选择质地柔软、深绿色的叶片，如菠菜叶。除去叶片上较粗大的叶脉和叶柄。并在实验前做适当干燥处理，可以将其自然风干，如果有条件也可以将叶片放在冰箱中冷冻几小时，这样可以降低叶片含水量,提高叶绿体中色素的提取效率。 画滤液细线 这一步骤书本要求用毛细吸管画线，首先受学校设备所限,不易拉出很细且符合要求的毛细吸管, 就算有毛细吸管，操作时学生很难把握,毛细吸管非常容易断裂，这样划出的线粗细不均匀。 改进方法有三种: 一是可以用用去掉笔芯的自动铅笔代替毛细吸管，每个高中生手头都有这种材料，而且好操作，画出的线又直又均匀；二是采用“印泥”法,用较薄且干净的盖玻片，沾取色素提取液，有另一载玻片将色素提取液划薄，再将盖玻片印在滤纸条上，印出的色素液线又细又齐又匀．比用毛细吸管省时省力；三是可以将制备好的定性滤纸条距底部1cm处折起并轻压，用滴管吸取少量的色素提取液尽量平铺在载玻片上，将折好的的滤纸轻轻蘸在色素提取液上，这样得到的滤液线也是又细又直的。 这步中，滤液线要求画两到三次，并且要求滤液干燥后，学生做实验时很容易在滤液细线未干就重划, 导致滤液细线越划越粗, 不符合要求；滤液细线未彻底干燥就放入层析装置中, 色素带上升缓慢, 色素带分离效果不好。针对上述情况, 老师可以在做实验时准备一只家用电吹风机, 待学生划完滤液细线以后,用电吹风机吹干, 然后再划, 重复几次彻底吹干再放入层析装置中进行层析。将实验由自然干燥改进为电吹风干燥,以实验的成功率。 分离色素 书本上的方法是将适量的层析液倒入试管或小烧杯中, 将滤纸条( 有滤液细线的一端朝下)轻轻插入到层析液中, 随后用棉塞塞紧试管口或用培养皿盖盖住小烧杯。尽管此方法强调: 一定不要让层析液没及滤纸上的滤液细线, 然而操作中最易出问题的恰恰正在这里。将适量层析液倒入试管中，层析液很容易沾在试管壁上，将画过滤液细线的滤纸条插入小试管中的层析液时，试管壁上的层析液被滤纸条吸收后，会影响色素随层析液在滤纸条上的扩散，从而影响层析效果；由于加入试管中的层析液不能没及滤纸条上的滤液细线，否则会使实验失败，试管中应加入多少层析液才算“适量”，教材没有明确的数量，也给学生操作带来一定的困难；试管的规格教材没有介绍，采用不同规格的试管，直接影响所用滤纸条的长度和宽度。一般尽量采用小试管，用小试管实验时，必须将试管固定在试管架上，总之操作比较麻烦。 改进的方法有很多种： 第一种：先取一口径小于圆形滤纸的烧杯，然后取一圆形滤纸，用小刀在滤纸上刻出间隔和滤纸条差不多宽的多个缺口，用于插入和固定滤纸条。用透明胶将制作好的圆形滤纸固定在烧杯口上，作为简易盖子。将定性滤纸条插入缺口中。此装置可同时放置多条滤纸条，而且位置固定，可避免滤纸条贴壁或相互交叠。简易盖子可减少层析液挥发，同时能减少丙酮对学生的毒害。此装置制作简便，可重复使用，减少丙酮的消耗。 第二种：灯芯法。首先剪取长4cm的粗棉线，并浸泡于色素滤液中，然后取出吹干。此灯芯也可以用滤纸条制备，将宽4cm*4cm的滤纸条放入盛有滤液的表面皿中浸透，取出用镊子夹紧用吹风机吹干，然后捻灯芯。再取一个圆形滤纸片，在中心用针扎一个眼，将干燥后的灯芯从孔中穿出。最后培养皿中加2ml层析液，把制备好的插有灯芯的圆形滤纸片放在培养皿上，一定要让灯芯插入层析液中，用另一玻璃皿盖好，即可观察层析现象。此方法分离色素，一方面减少画滤液线等操作，降低了难度；另一方面，用改进后的层析液分离色素，得到的是由外到内依次看到四个不同颜色的同心圆环，即胡萝卜素(橙黄色)、叶黄素(黄色)、叶绿素a(蓝绿色)、叶绿体b(黄绿色)，增强了实验效果，提高了学生的兴趣，调动了学生的学习积极性。 第三种：用50mL的小烧杯作为层析装置。制备的滤纸条规格为1cm×6cm。实验时将滤纸条（有滤液细线的一端朝下）沿烧杯内壁插入烧杯底部，另一端则自然倒向对侧，斜靠在烧杯内壁。用注射器吸取的层析液，注射器和有胶管的针头连接，胶管和针头放入小烧杯中，用培养皿盖住小烧杯。这时，可以将注射器