不同生姜提取物对小鼠肝细胞的毒性与肝细胞保护作用研究.pptVIP

不同生姜提取物对小鼠肝细胞的毒性和肝细胞保护作用研究 指导教师：卢静 答辩人：王菲 答辩时间：2009.6.5 立题依据 近些年来各种肝脏疾病严重地影响着患者的身体健康和生活质量。但众所周知，肝病药物或多或少地存在一些副作用，使得患者在使用时多了一份担心。鉴于此，越来越多的研究人员在寻找治疗肝病药物时把目光投向了药食两用的食材上。 据报道，生姜中的姜黄素具有抗氧化功效，能够清除自由基，对生物体的脂质氧化具有很好的抑制作用。 氧化性损伤是肝细胞损伤的主要机制之一。 那么生姜粗提物能否成为辅助药物的保健品对人体起到保肝的功效？并且经浓缩后的生姜粗提物的毒性如何有待进一步研究。已有研究表明姜精油对果蝇具有较强的生殖毒性。因此生姜粗提物的毒性研究显得尤为重要。 创新点 国内学者大都运用生化指标、组织学观察和免疫学测定方法研究物质的保肝功效。而本文采用细胞毒性方法测定肝毒性并考察生姜提取物对不同肝毒物诱导的肝损伤的抑制作用。 实验样品 实验动物 昆明种小鼠（吉林大学实验动物中心），雌性，清洁级，合格证号：SCXK-(Ji)-2003-00001。常温饲养，供食供水。 实验方案 对肝脏系数影响实验流程图 对肝脏系数影响结果 对肝脏系数影响结果 小结 MTT法原理 MTT简称四唑盐,又名噻唑蓝。活细胞的线粒体中含有丰富的脱氢酶,可使活细胞吞噬的MTT分子还原,在细胞内形成不溶于水的紫蓝色结晶,二甲基亚砜液则可溶解胞浆中这种紫蓝色结晶,而呈紫色反应,结晶物溶解越多,紫色反应越明显,结晶物形成的量与活细胞数以及细胞活性呈正相关关系。通过比色反应,用Elisa检测仪测定各孔光吸收值(OD),即可以较准确地反映各材料对实验用细胞生长和活性的影响。MTT显色方法已被公认为是一种敏感、简便、快速、定量并且重复性好的细胞毒性实验方法。 细胞毒性实验流程图 细胞毒性实验结果 细胞毒性实验结果 小结 抗氧化实验原理 超氧阴离子 本实验采用邻苯三酚自氧化法。即采用邻苯三酚自氧化法产生超氧阴离子，生成有色中间产物，吸光度随之增加，吸光度值与反应时间呈良好的线性关系。但是加入抗氧化性物质后会对其产生清除作用，从而对其进行抗氧化性能的评价。 羟自由基 本实验采用Feton体系法产生羟自由基。即: H2O2 + Fe2 + →·OH + H2O + Fe3 + 。然后在体系中加入水杨酸捕捉羟自由基并产生有色物质,该物质在510nm处有最大吸收。可以利用该吸光度值来表示羟自由基的含量。 抗氧化流程图 超氧阴离子实验结果 超氧阴离子实验结果 超氧阴离子实验结果 羟自由基实验结果 羟自由基实验结果 小结 小结 保肝功效实验结果 保肝功效结果 小结 结论 实验图片 发表论文 致谢 论文工作的完成，要特别衷心地感谢敬爱的导师，几年来，她无言的帮助与鼓励给了我莫大的支持，她兢兢业业的工作作风和求真务实的科学态度永远是我学习的动力。 特别感谢卜秀娟老师、刘新鑫老师和李凤芝老师在实验上给予的帮助指导，提出了许多有价值的意见和建议。 感谢同届毕业的学友们，黄玉艾、沈雪、王昊、姜玮、张博超和张存花，因为你们的陪伴，我的本科生生涯变得充实而快乐；感谢在读的师弟师妹们，郭文秀、钱文辉、黄焕杰、张绍康和尹航，感谢你们在我实验过程中给予我的大力帮助。 最后，感谢母亲多年来给我的支持、关怀和理解，使我能够全身心地投入学习和工作！ 恳请大家批评指正 * * 20g姜粉 50℃水浴3h EEG AEG 每次加200mL水 200mL乙醇 煮煎3次 过滤 浓缩 对肝毒物的抑制作用 抗超氧阴离子和羟自由基 肝细胞毒性 对肝脏系 数的影响 4 3 2 1 生姜提取物灌胃 注射环磷酰胺 处死 取肝 对肝脏系数的影响 0.074 0.066 0.07±0.003 TW 0.067 0.057 0.062±0.001 CP 0.071 0.06 0.065±0.004 1×EEG+CP 0.07 0.06 0.065±0.003 1×EEG 0.074 0.066 0.07±0.003# 1×AEG+CP 0.069 0.056 0