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与细胞衰老和癌变 周俊宜 中山医科大学生化教研室 目 录 端粒的结构与功能 端粒酶的结构与功能 端粒、端粒酶与细胞衰老 端粒、端粒酶与恶性肿瘤 C A A 端粒酶蛋白质 1995年，首次从四膜虫克隆到端粒酶蛋白质组分： p80 p95 遗传密码 碱基互补 人类端粒酶蛋白质 ？ 同源序列 核酸探针 重组DNA分子 TTGGGGTTGGGGTTGGGG 5’ 5’ TTGGGGTTGGGGTTGGGG CCAACCCC 3’ 5‘ oH3’ 5’ CCAACCCC 3’ 5’ TTGGGGTTGGGGTTGGGG CCAACCCC 2.聚合 1.结合礼$ 3.移位 爬行模式 3 端粒酶的功能 TTGGGG TTGGGG CCAACCCC 末端补齐机制： 5‘ GGGGTT （GGGGTT）n 端粒酶 5’ G-G配对回折 3‘ 5’ DNA聚合酶 4 端粒酶活性的测定 1994年，Kim首创端粒重复扩增法（TRAP）。 陷阱的电泳检测 梯形条带 加样孔 TS引物 CX引物 细胞提取物 端粒重复序列 PCR扩增产物 T4g32,Rnasin TRAP buffer dNTPs 细胞提取物 TS 引物 Taq E CX 引物 23～25℃ 30 min PCR仪 生物素 亲和素 地高辛 酶标抗地高辛抗体 酶标仪检测 半定量 。 In human blood cells, the length of telomeres ranges from 8,000 base pairs at birth to 3,000 base pairs as people age and as low as 1,500 in elderly people. (An entire chromosome has about 150 million base pairs.) Each time a cell divides, an average person loses 30 to 200 base pairs from the ends of that cells telomeres. In most somatic tissues, telomerase is expressed at very low levels or not at all -- as cells divide, telomeres shorten. Short telomeres may be a signal for cells to senesce (stop dividing). Telomerase and Senescence 染色体 端粒 端粒 端粒与细胞存亡密切相关 细胞分裂 细胞分裂 端粒长短与细胞生命历程密切相关 染色体 端粒 端粒 细胞将停止分裂而趋于老化 细胞分裂 细胞分裂 染色体 端粒 端粒 细胞将停止分裂而趋于老化 * * zhoujy@ 中 山 医 学 院 生 化 教 研 室 周俊宜 5’ 5’ 端粒消耗 端粒维持 细胞衰老 细胞永生化 染色体DNA 端粒 端粒 “人体的正常细胞经过有限的分裂次数后即进入衰老阶段，停止增殖而最终走向衰亡。呈恶性生长的癌细胞似乎摆脱了正常衰老过程的约束，在无拘无束地高速生长中获得“永生”。衰老和肿瘤相互对立却又同为人类的“天敌”，两者之间千丝万缕的关联一直以来为人们所关注。 近年来端粒酶热点的出现被认为是联结着肿瘤和衰老研究的一条全新纽带，国际权威期刊单元、科学等逐年递增地刊载相关论文和报道，对端粒和端粒酶这一研究方向予以相当关注，认为有可能对肿瘤、衰老等重大生命课题产生深远影响。” 二十世纪三十年代，Barbava McClintock和Hermann J.Muller发现，染色体的末端有一种能稳定染色体结构和功能的特殊成分。如果缺少了这种成分，染色体之间就会互相粘连、出现结构的变化或其它错误的行为，以致影响到染色体的生存和正确复制并进一步威胁到细胞的存亡。于是从希腊文的末端（telos）和部分（meros）二词为这种特殊的成分创造了一个全新的术语端粒（telomere）。 1 端粒的发现 断端降解、断端融合、结构功能破坏 染色体DNA X射线 从希腊字的末端“telos”和部分“meros”创造了一个全新的单词：端粒—— telomere 端粒帽 染色体 端粒帽 端粒的精确组成则是在七十年代末才首次被提出。1978年，美国科学家Blackburn发现，单细胞池塘生物四膜虫（Tetrahymena）的端粒是由一种极短的简单重复序列TTGGGG多次重复而成。 从那以