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微生物的遗传变异与育种 本章内容： 基因突变与诱变育种 基因重组 菌种的衰退、复壮及保藏 第一节 基因突变与诱变育种 一、基因突变： （一）突变类型： 温度敏感型突变 （二）突变的特点： 1）不对应性：环境与变异无对应性 2）自发性：非人为的诱变因素下发生 3）稀有性：生物体的自发突变率为10-10～10-12 4）独立性：一个基因的突变对其它基因突变无 影响 5）诱变性：诱变剂可提高突变率10~105倍 6）稳定性：突变性状稳定、可遗传 7）可逆性：有回复突变 （三）基因突变自发性及不对应的证明： 变量彷徨试验： 涂布试验试验： 平板影印培养试验： 1.变量彷徨试验： 1)抗性细胞的出现，是在接触噬菌体之前； 2)喷上噬菌体，仅起淘汰野生型和鉴别抗性株作用； 3)由于甲方高度彷徨，说明突变是随机的。 2. 涂布试验 3. 平板影印 由此表明： 突变是自发的与环境不对应的。 二、突变与育种 （一）自发突变与生产育种 3、自发突变的机制： 自发突变(spontaneous)：在非人为的情况下由于 遗传 物质的微小变化引起的性状变异。 原因可能是： 1）环境因素； 2）自身有毒产物的积累； 3）互变异构效应； 4）环出效应等。 （二）诱变育种 1. 概念： 诱变育种是用物理或化学的诱变剂使诱变对象内的遗传物质（DNA）的分子结构发生改变，引起性状变异并通过筛选获得符合要求的变异菌株的一种育种方法。 2. 诱变剂： 2）种类： 物理因子（phisical agents) 化学因子(chemical agents) 转座子(transposable elements) 物理诱变剂：U.V、χ、γ、快中子、超声波等。 化学诱变剂： 烷化剂 (alkylating agents)： 如：氮芥、硫酸二乙酯、亚硝基胍、NTG等 机制：将烷烃加在含氮碱基上，改变氢键性质 碱基类似物 (base analogs)： 如：叠氮胸腺嘧啶（AIT）等； 机制：在DNA复制时将碱基类似物插入DNA中，而碱  基类似物没有正常碱基的氢键性质，在DNA复 制时出现突变体。 插入剂 (intercalating agents): 3. 诱变程序： 4. 诱变的主要环节 1）诱变剂的选择： c. 处理剂量：测致死率。 方法 Ames test：对化学诱变剂做检测 菌种：鼠伤寒沙门氏菌 his -； 原理： his -在基本培养基上不长；而发生回复突变则长。 Ames test 方法示意图 2）出发菌株： 育种的原始菌种；应具备： 对诱变剂的敏感性高； 生产中选育过的自发变异菌株； 本身具有一些有利性状； 对代谢产物有一定积累； 已经发生过某些变异。 3）单孢子或单细胞悬液的制备 a. 必要性： 单细胞可以均匀地接触诱变剂 避免出现不纯的菌落——菌种退化 c. 方法： 三角瓶内加φ0.5cm玻璃珠打散10-15min; 加０.3%吐温80（表面活性剂） 用无菌脱脂棉过滤。 4)设计和采用效率高的筛选方案和方法 初筛： 平板上做定性、半定量的测定，观察突变株 的生理效应范围。 方法：梯度平板法；（抗性菌株） 纸片法； （抗性菌株） 透明圈法；（淀粉酶产生菌株等） 变色圈法；（氨基酸生产菌株） 如：用梯度平板法筛选抗性菌株 抗生素法直接筛选抗药性突变体 复筛： 较精确的生物化学分析方法 ——做摇瓶测定 （见P250） 三、营养缺陷型的筛选 （一）概念： 2、筛选用的培养基 基本培养基（minimal medium,MM）[-]：满足野生 型菌株营养要求最低成分的组合。 完全培养基（complete medium,CM）[+]：满足一 切auxo生长的天然或半组合培养基。 补充培养基（supplemented medium,SM）[x]：在 MM中有针对性地加入一或几种营养成 分以满足相应 auxo生长的组合培养基。 （二）筛选方法 auxo的鉴定