10生物技术制药第 4节.pptVIP

第四章 抗体制药 本章主要内容 第一节 概述 第二节 单克隆抗体 第三节 鼠源性单克隆抗体的改造 第四节 基因工程抗体和抗体工程 第五节 抗体诊断药物 第六节 抗体治疗药物 第一节 概述 抗体是能与相应抗原特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。 它是机体免疫系统受到抗原物质刺激后，B淋巴细胞被活化、增殖和分化为浆细胞，由浆细胞合成和分泌的球蛋白。 血清蛋白分为白蛋白、甲种(α)球蛋白、乙种(β)球蛋白和丙种(γ)球蛋白 抗体活性存在于丙种球蛋白组分. 将具有抗体活性及化学结构与抗体相似的球蛋白统称为免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig) 第二节 单克隆抗体 单克隆抗体是将抗体产生细胞与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞相融合，通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系而产生的。这种抗体是针对一个抗原决定簇的抗体，又是由单一的B淋巴细胞克隆产生的，故称为单克隆抗体。 单克隆抗体和多克隆抗体 免疫学知识: 人体和动物都有免疫系统，包括特异性免疫和非特异性免疫。 非特异性免疫 宿主的屏障; 吞噬细胞; 正常组织和体液中的抗菌物质; 炎症反应. 不直接杀死病原体，但能配合免疫细胞、抗体或其他防御因子使它们发挥较强的免疫功能，如补体、干扰素。 第三节 鼠源性单克隆抗体的改造 最初制备的单克隆抗体都是鼠源性的，大量应用于人体时可产生人抗鼠抗体，使其作用和效果都受到严重影响，甚至有毒副作用。 改造目的 改造鼠源性单克隆抗体的目的有两个： 1、一是降低免疫原性； 2、二是降低相对分子量，增加组织穿透能力。 一、人-鼠嵌合抗体 抗体同抗原结合的功能取决于抗体分子的可变区，同种性免疫原性则决定于抗体分子的稳定区。 人-鼠嵌合抗体：鼠源性单克隆抗体的可变区基因和人免疫球蛋白的稳定区基因连接起来，再共转染骨髓瘤细胞，就可表达出完整的人-鼠嵌合抗体。 二、改形抗体 用鼠源性单克隆抗体的互补决定区序列替换人免疫球蛋白分子中的互补决定区序列，则可使人的免疫球蛋白分子具有鼠源性单克隆抗体的抗原结合特异性。由于抗体分子中鼠源部分只占很小比例，可基本消除免疫原性。最大问题是抗体的亲和力下降，甚至丧失活性。 三、小分子抗体 基因工程的小分子抗体仅表达鼠源性单克隆抗体的可变区，其相对分子量仅为原抗体的八十分之一到三分之一。 正在研制的小分子抗体 1、Fab片段抗体，由完整的轻链L和重链的可变区加部分恒定区(VH+CH1)； 2、FV抗体，VH和VL组成； 3、单链抗体（SCFV），由 VH和VL 通过一段连接肽连接而成的重组蛋白； 4、单域抗体，由重链的或轻链的单个可变区（ VH或VL ）组成； 5、最小识别单位，由互补决定区构成。 单链抗体的优点 1、分子小，容易渗透到组织中（包括肿瘤），增加有效药物浓度； 2、单链易于进行分子改造，如与毒素拼接； 3、免疫原性小，体内半衰期短。 缺点：稳定性较低；功能单一；亲和力低，稳定性差，体内清除过快。 四、双功能抗体 就是双特异性单链抗体：将抗A抗原抗体的轻链可变区(VLA)与抗B抗原抗体的轻链可变区(VLB) 通过短肽连接构成的双链抗体。 结合抗原的两个臂具有不同的特异性。 双功能抗体的优点 一个臂识别肿瘤细胞表面抗原，包括肿瘤相关抗原、癌基因产物、特殊的白细胞分化抗原、病毒蛋白抗原、特异性受体等，并有效结合；另一个臂可识别免疫效应细胞及分子,如CD3(T细胞识别抗原的单位）、毒素、药物等。 五、抗体融合蛋白 构建抗体融合蛋白的原则：将第一个蛋白的终止密码子删除，再接上带有终止密码子的第二个蛋白基因，即可实现两个基因的共表达。 抗体酶，酶-抗体型融合蛋白，在药物治疗中有广阔的前景，它可在靶向位置上将前体药物转化成有效的药物，从而避免了对正常组织的损害。 第四节 基因工程抗体和抗体工程 抗体研究的三大阶段：多克隆抗体；单克隆抗体；以基因工程方法制备抗体。 基因工程抗体：不用人工免疫动物和细胞融合技术，完全用基因工程技术制备人源性抗体，而且还能利用基因转移和表达技术，通过细菌发酵或转基因动物、植物大规模生产抗体。 1、获取目的基因：RNA反转录PCR获取抗体某一特定基因区段； 2、载体：噬菌粒； 3、淘筛：抗原固相化后，对噬菌粒群吸附、洗涤和洗脱，再感染扩增，如此反复； 4、表达与鉴定：鉴定目的基因，导入感受态菌株，表达 原核细胞、真核细胞、转基因植物和 动物等表达方式。 基因工程抗体的表达 原核生物 融合表达和分泌表达 真核生物 都是分泌表达 转基因植物 烟草 转基因动物 单基因水平。 第五节 抗体诊断药物 抗原和抗体的特异性结合在体内和体外都可呈现某种反应。在体外可发生凝集或沉淀等反应，可用已知抗体来鉴定抗原，作病原学的诊断和血型测定，称为血清学鉴定。 在体内，可表现为