第二节 基因工程的原理与技术 - 1.pptVIP

* 基因工程的工具 限制性核酸内切酶 DNA连接酶 运载体 工具酶 A T G C A G C T 磷酸二酯键 DNA连接酶 DNA聚合酶　 DNA解旋酶 　DNA酶 必须具备的条件： 常用的运载体： 大肠杆菌的质粒上常有抗性基因作为标记基因 ☆ 基因的运输工具——运载体(载体) 作用： 质粒 存在 最常用质粒 特点 ①与目的基因相连接；②将目的基因导入受体细胞 1、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存,而对宿主细胞的 生存没有影响。 2、具有多个（种）限制酶切点，以便与目的基因连接； 3、具有某些标记基因，便于进行检测和筛选。 质粒、λ噬菌体、动、植物病毒 ☆ 基因的剪刀 —— ☆ 基因的针线 —— ☆ 基因的运输工具 —— 限制性核酸内切酶 DNA连接酶 运载体（载体） 基因重组 分子水平(形成重组DNA) 操作水平： 变异原理： 技术优点： 能定向改造生物的遗传性状。 克服远缘杂交的障碍 思路：转基因技术实现了一种生物的某些性状 在另一种生物中表达。 密码子在生物界是通用的！ DNA( )　　　mRNA 蛋白质(性状) 转录 翻译 ２、几乎所有的生物的DNA分子都具有独特的双螺旋结 　构、基本组成单位都是脱氧核苷酸 基因工程的遗传学理论基础： ３、一切生物在蛋白质合成过程中共用一套密码子。 1、基因是决定性状的基本单位 基因 农业科技工作者在烟草中找到了一抗病基因，现在采用基因工程技术将该基因转入棉花，培育抗病棉花品系。请回答下列问题： （1）要使运载体与该抗病基因连接，首先应使用__________进行切割。假如运载体被切割后，得到的分子末端序列为　　　　，则能与该运载体连接的抗病基因分子末端是（　　） （2）切割完成后，采用　　　　　　酶将运载体与该抗病基因连接，连接后得到的DNA分子称为　　　　　　。 限制性内切酶 A　 DNA连接酶 重组DNA分子 基因敲除是应用DNA重组原理发展起来的一门新兴技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA重组原理，用设计好的DNA片段替代动物细胞内的基因片段，从而达到基因敲除的目的。在后基因组时代，研究的重点是利用转基因动物或基因敲除的动物研究基因的功能，运用基因重组进行基因敲除依然是构建基因敲除动物模型中最普遍的使用方法，其基本原理如右图所示。请回答下列问题： （1）在把目的基因导入受体细胞前，应选择一个合适的　　　　　　与之结合，在这一过程中所需要的工具酶是限制性内切酶和　　　　　　　。 （2）如果要获得一只含目的基因的小鼠，则一般是通过病毒感染或显微注射技术将目的基因导入受体细胞，选择的受体细胞应该是 。 （3）在此类基因操作中，通常可以用水母的发光蛋白作为标记物。水母发光蛋白有发光环，能在一定条件下发出荧光，现已将这种蛋白质的基因作为生物转基因的标记，在转基因技术中，这种蛋白质的作用是（ ） A．促使目的基因导入受体细胞中 B．促使目的基因在寄主细胞中复制 C．使目的基因的转移容易被检测出来 D．使目的基因容易表达成功 DNA连接酶　 　 运载体 受精卵 第二节基因工程的原理和技术 目的基因在宿主细胞中稳定和高效地表达 基本原理: 基因工程的基本操作步骤 1、获得目的基因 2、形成重组DNA分子 3、将重组DNA分子导入受体细胞 4、筛选含有目的基因的受体细胞 5、目的基因的表达 如何让大肠杆菌生产人的胰岛素？ 第一步: 获取目的基因 方法 1、化学方法合成 2、基因文库中寻找目的基因 目的基因的核苷酸序列已知 目的基因的核苷酸序列未知 基因文库中不是直接保管相应基因，而是保存受体菌，菌中含基因 *