常用的电泳液.doc

常用的配制：一、DNA电泳 1. Tris-乙酸（TAE：Tris/Acetate/EDTA） 浓贮存液/L（50×）：2mol/L Tris-碱，1 mol/L 乙酸，50 mmol/L EDTA 方法： 242.2 g Tris，用300mL水加热搅拌溶解后，加57mL冰乙酸，加入100mL 0.5mol/L EDTA（pH8.0），用冰乙酸调pH值至8.0，定容为1L。2. Tris-硼酸（TBE：Tris/Borate/EDTA） 浓贮存液/L (5×) : 90mmol/L Tris-碱，890mmol/L 硼酸盐，20mmol/L EDTA(pH8.0) 方法：54g Tris碱、27.5硼酸、20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)，水定容至1L。 使用液：（0.5×）：0.045mol/L Tris-磷酸，0.001mol/L EDTA 注：进行聚丙烯酰胺凝胶电泳使用的是1×TBE，琼脂糖凝胶电泳使×TBE，这是因为聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小，需加强离子强度，提供稍高一些的电流。 3. Tris-磷酸（TPE） 浓贮存液/L（10×）：0.9mol/L Tris-磷酸、0.02mol/L EDTA 方法：108g Tris碱、15.5ml 85%磷酸（1.679g/ml）、40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)， 水定容至1L。 使用液（1×）：0.09mol/L Tris-磷酸、0.002mol/L EDTA Tris-甘氨酸Tris-甘氨酸缓冲液用于SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。浓贮存液/L（×）：mmol/L Tris 、1.25mol/L EDTA、0.5%SDS 方法：15.1g Tris碱9.4甘氨酸（电泳级）（pH8.3）50ml 10%SDS（电泳级）（1×）25mmol/L Tris 、250mmol/L EDTA、0.1%SDS 5.TBS 电泳缓冲液：100ml TBE，0.5ml的10% SDS。 .6×上样液：0.25%溴酚蓝（BPB），40%蔗糖，10mmol/L EDTA（pH8.0）。即2.5ml 1%溴酚蓝，2.5ml 1%二甲苯青FF，4g蔗糖，补足水到10ml，4℃保存。 二、RNA电泳 1.RNA标准相对分子质量如28S和18SrRNA以及9S兔β-球蛋白mRNA，其RNA大小为6333、2366和710个核苷酸。 2.DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水： 0.1% DEPC，水，即加1ml DEPC（diethlpyrocarbonate）于1L水中，使DEPC的体积分数为0.1%。在37℃温浴至少12h，然后在15psi条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺其反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。 3.5×FGRB（formaldehyde gel-running buffer）： 100mmol/L 3-（N-吗啉代）-丙磺酸（MOPS，pH7.0），40mmol/L醋酸钠，5mmol/L EDTA（pH8.0）。即准确称取20.93g MOPS用DEPC处理水溶解，再加入13.3ml的3 mol/L NaAc（pH7.0），10ml的0.5 mol/L EDTA（pH8.0），最后定容至1000ml，过滤灭菌后避光存（pH7.3）。 4.RNA凝胶上样缓冲液： 50%甘油、1mmol/L EDTA（pH8.0）、0.25%溴酚蓝、0.25%二甲苯青FF。即2.5ml甘油、10μL 0.5 mol/L EDTA（pH8.0），1.25ml 1%溴酚蓝，1.25ml 1%二甲苯青FF，用DEPC处理水定容至5ml，分装后-70℃保存。 5.RNA胶（1%）: 1g琼脂糖加62ml DEPC水，加热溶化后冷却至60℃，再加20ml的5×FGRB和17.8ml的37%甲醛，混匀后制胶。 6.甲酰胺（去离子）： 将10ml甲酰胺和1g离子交换树脂混合，室温搅拌1h后用Whatman滤纸过滤，等分成1ml于-70℃贮存。 7.其他试剂： 37%甲醛、80%乙醇（利用DEPC处理水配制）。 三、蛋白质电泳 1.2.10%（M/V）过硫酸铵（APS）： 1g APS加ddH2O至10ml。使用时尽量现配现用，4℃存则两周内用完，最多不能超过一个月。-20℃可存两个月，但一旦解冻后尽快用完。3.TEMED和DTT（dithiothretol）：存放在4℃冰箱。4.30%胶母液（Acr-Bis）： 30% Acrylamide、0.8%bis，即Acrylamide 30g、bis 0.8g定容100ml，可在4℃存放数月。 5.分离胶缓冲液（pH8.8）： 6.浓缩胶缓冲液（pH6.8）：1mol/L Tris，即Tris