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第五章 免疫分析法 第一节 抗原 一、全抗原和半抗原 1、定义 抗原（Antigen）系指能在机体中引起特异性免疫应答反应的物质。通常物质的抗原性（Antigenicity）具有两种含义： 首先是指当其被注射入合适的动物体内后，能促使动物产生循环抗体或改变免疫细胞的反应性，即具有免疫原性（Immunogenicity）； 其次是指具有能与特异抗体作用的性质，即具有抗原特异性（Antigenic Specificity）。 同时具有免疫原性和抗原特异性的物质被称为全抗原； 只能与特异抗体作用但不能引起机体免疫应答的简单分子被称为半抗原（Hapten）。 一、全抗原和半抗原 2、药物分子的免疫原性 大多数的药物分子，由于相对分子质量较小，通常被认为是半抗原。 小分子药物，如青霉素（Penicillins）、链霉素（Streptomycin）等抗生素在特定的条件下，如与福氏完全佐剂混合之后免疫动物，也可使实验动物产生免疫应答，但这种应答反应通常比较弱； 在药物免疫分析中，通常首先利用药物分子和载体蛋白的结合物--合成抗原免疫动物，这样有利于在动物体内产生对药物分子的强免疫应答反应，从而得到大量的抗药物分子的特异性抗体 。 一、全抗原和半抗原 佐剂又称免疫增强剂。它可以增强抗原的免疫原性及改变机体的免疫反应性，达到增强免疫力或提高抗体产生水平及在体内维持时间明显延长。 通常多用福氏佐剂（Freund adjuvant） ，它分为： 福氏完全佐剂（Incomplete Freund adjuvant）； 抗原水溶液1ml、液体石蜡4ml、羊毛脂1g、卡介苗50mg混合而成油包水的乳悬液。 福氏不完全佐剂（Complete Freund adjuvant）： 去掉福氏完全佐剂中的卡介苗即为不完全佐剂。 一、全抗原和半抗原 3、药物分子的抗原特异性 1）实践中，当药物分子和蛋白质载体结合后，诱导机体产生的抗体通常为不均一抗体。即：有多个不同的抗体，各抗体的特异性略不相同； 2）和蛋白质的结合还可能导致药物分子原有抗原特异性的改变—抗原决定簇改变。 二、人工抗原的合成 （一）半抗原和载体结合的化学反应 1、多肽类激素 （1）活化蛋白质或多肽的游离羧基形成肽键的结合剂 碳化二亚胺类（EDC） 异唑盐类 烷基氯甲酸类 （一）半抗原和载体结合的化学反应 （2）连接氨基的结合剂 二异腈酸类 二亚胺酯 卤代硝基苯 （一）半抗原和载体结合的化学反应 2、甾体 甾体激素不能直接和载体蛋白形成有效的共价键，因此需要先制备甾体的衍生物（含游离的羧基），然后再与载体蛋白连接，制成全抗原。 （1）甾体衍生物的制备 琥珀酸衍生物 肟衍生物 （2）甾体衍生物和蛋白质的结合反应 甾体衍生物的游离羧基，可以经碳化二亚胺缩合反应而与载体蛋白中的氨基形成肽键。 （一）半抗原和载体结合的化学反应 3、抗生素 （1）β-内酰胺类抗生素 β-内酰胺类抗生素的β-内酰胺环在偏碱性条件下可以与蛋白质的自由氨基以酰胺键的形式共价结合。其反应机理为伯氨基作为亲核试剂，攻击β-内酰胺环的羰基碳原子，以分子间的酰胺键替代了原内酰胺键。 （2）氨基糖甙类抗生素 氨基糖甙类抗生素其分子结构一般均含有氨基，因此可以用碳化二亚胺为连接剂实现药物和载体蛋白质的连接。 也可以用戊二醛为交联剂，在碱性条件下通过Schiff碱结构，将氨基糖甙类抗生素分子中的氨基和蛋白质中的自由氨基连接。 4、半抗原和载体结合的化学反应的选择 1）在选择结合半抗原的化学反应时，应考虑不同的连接方式可能对抗体的专一性产生不同的影响。 2）为得到特定抗原决定簇相对单纯的合成抗原，可根据半抗原的化学特性及连接反应的化学特性选择连接的半抗原。 如不同青霉素的结构差异主要为侧链的不同，因此选择抗侧链特异性的抗体是减少不同青霉素交叉反应的关键。 第二节 抗体 一、基本概念 抗体（Antibody, Ab）是机体免疫细胞被抗原激活后，由分化成熟的终末B细胞--浆细胞合成、分泌的一类能与相应抗原特异性结合的具有免疫功能的球蛋白（免疫球蛋白）。 按理化性质和生物学功能，免疫球蛋白可分为IgG、IgA、IgM、IgE、IgD五类。其中IgG含量最高，约占总量的70%。IgG在免疫分析中是最常用的抗体。 二、抗体的结构 抗体是具有4条多肽链的对称结构，其中2条较长、相对分子量较大的相同的重链(H链)，2条较短、相对分子量较小的相同的轻链(L链) ，链间由二硫键和非共价键联结。 一个抗体分子上的两个抗原结合部位是相同的，位于两臂末端称抗原结合