环境毒理学验(一)学生.docVIP

实验一 第一部分 实验动物的识别、固定和染毒方法 （一）常用实验动物的性别判定 1．大、小鼠、沙鼠的性别判定 成年鼠主要以生殖器与肛门之间的距离长短及肛门与生殖器之间有无被毛为标志： 雄鼠的生殖器距离肛门较远。雄鼠生殖器与肛门之间长毛。雄鼠的生殖器突出，且较雌鼠大。雄鼠乳头不显著，而雌鼠则非常显著。 根据外生殖器(阴蒂或阴茎)与肛门之间的距离来判定这些动物新生仔的性别判别要有一定经验 2．豚鼠的性别判定（同上） 3．兔子的性别判定（同上） （二）常用动物的抓取和固定的方法 1．带着爱护动物的原则接触动物。动物在兴奋的时候要等待它安静下来。抓取的时候，不要突然触摸动物。要事先给动物一个暗示，如大鼠和沙鼠可以轻轻叩一下笼子给一个信号，逐渐接近它进行抓取固定。 2.选择最适合实验动物的固定方法，要根据受试动物的给药部位或采血方法的不同，事先选择用手还是用固定器来固定。以及给药和固定是用1个人还是用2个人。实验动物进行抓取和固定有一定危险，大鼠等动物如不及早固定就有被咬伤的危险，需要防护，操作时戴上帆布手套。 小鼠的捕捉：用右手抓住小鼠尾尖向后拽，小鼠欲向前爬行，再以左手拇指和食指抓住小鼠头颈部皮肤，将小鼠至于左手中。 大鼠的捕捉：操作同上，抓大鼠需要防护，操作时戴上帆布手套。 豚鼠的捕捉：拇指和另外四指从豚鼠的背部分别绕到其两侧腋下， 即可抓起豚鼠。注意不要压迫其胃部。对于体重较重的豚鼠，还应用左手托住其身体。 家兔的捕捉：捕捉家兔切忌只抓两耳，以免使其受伤。应用右手大把抓住颈背部的皮肤，轻轻地提起来，同时用左手托住其臀部。为了避免家兔头部转动，也可将兔皮连同两耳一起抓起，提起时重量落在皮肤上。 （三）常用的动物染毒方法 1．经口染毒 （1）添加给药：此方式不费工夫，也不会因操作失误而导致动物死亡，但由于动物的状态和嗜好的不同，饮水和饲料的摄取量不同，大部分很难准确掌握给药量，另外，室温下易分解物质的给药，小剂量被检物质的给药，都很难准确平均添加。经口染毒是毒理实验中常用的染毒途径，特别是对那些易挥发的液体毒物，通常用消化道染毒的方法来研究其毒性。 （2）灌胃给药：为准确掌握给药量，可用强制式灌胃方法。强制灌胃方式由于能掌握给药时间和剂量，能记录发现症状的时间。另一方面，强制灌胃方式与添加给药方式相比，强制灌胃方式费时间，还对动物造成一定程度的机械的和心理的影响。要减少这些不良影响，有必要熟练掌握灌胃技术。 灌胃前要求动物空腹：一般在染毒前禁食3-4小时。其毒物剂量以mg/kg计算。 a．灌胃法给药：小鼠、大鼠 器材：大、小鼠灌胃针头，注射器(lml和5ml)。 操作：鼠的灌胃可一人操作，术者用左手拇指和食指捏住鼠颈部皮肤，其余各指与手掌并拢挟住鼠臀部（小鼠挟尾）举起待试。右手持盛有受试物的注射器（带灌胃针头），将针头插入动物口中，沿咽后壁徐徐插入食道，插入时应无阻力，否则应立即拔出重插，以免损伤或穿破食道或误入气管，插入深度一般为小鼠3-4cm，大鼠或豚鼠4-6cm，然后将毒物迅速注入即可。 b．灌胃法给药：兔 ①灌胃量，小鼠0.2-1ml，大鼠1-5m1，兔5-20ml。 ②灌胃针长度，小鼠3cm左右，大鼠5cm左右，兔15cm（导尿管）左右。 （3）豚鼠吞咽给药法： 把豚鼠放在台上，实验者用左手从背部向头部使劲固紧豚鼠，并用拇指和食指分别对准左右口角处让其开口。实验者把药物放在豚鼠舌根部，让它闭上嘴咽下。 2．静脉注射 （l）小鼠、大鼠的尾静脉注射：小鼠，大鼠有三根尾静脉，注射前充分挤压尾部，使血管充盈，以利观察血管。 （2）大鼠，沙鼠，豚鼠的后肢浅背侧足中静脉注射。 （3）豚鼠、兔的耳缘静脉注射。 （4）连续给药时的注意事项 在连日反复静脉给药时，要从尾尖部到尾根部变换血管位置。另外，血管也应左右交换地选择。采用注射染毒，要求毒物对局部皮肤损害不能太大，如果有严重局部剌激或损害者则不宜选用。 3．腹腔注射 器材：5-10ml注射器，6号针头（小鼠1ml注射器，5号针头）。 操作：此法可一人操作，擒鼠方法与灌胃同，但要使鼠腹部向上，右手持盛有受试物注射器于动物左下腹（或右下腹）约1/3处，略靠外侧垂直剌入腹腔后成45o角入针1/3-l/2长度，注射即可。 注意事顶： 严防刺入膀胱及其它脏器，如果右下腹注射要防止刺入肝脏。 针头不可太粗， 以免药物从注射孔流出，一般采用5-6号针头。 4．皮下注射 动物：小鼠、大鼠 操作：擒鼠法与上同，颈部皮下注射，亦可将鼠俯卧固定，使鼠不得移动，暴露颈部，并用左手揪起颈部皮肤，右手持盛有药液注射器针头挑起皮肤以20o角斜剌皮下并注射之，有鼓包为注射入皮下。 5．经皮染毒： 经皮染毒是毒理学研究中重要染毒途径之一，在生产条件下有很多毒物呈液态、固态乃至是气态、蒸气状态的形式存在，均能经