生物样品中药物定量分析的指原则与实验实施.pptxVIP

生物样品定量分析指导原则与实验实施;方法学确证是整个药代动力学研究的基础。 所有药代动力学研究结果，都依赖于生物样品的测定，只有可靠的方法才能得出可靠的结果。 通过准确度、精密度、特异性、灵敏度、重现性、稳定性等研究建立了测定方法，得到了标准曲线后，在检测过程中还应进行方法学质控，制备随行标准曲线并对质控样品进行测定，以确保检测方法的可靠性。;CFDA关于相关生物样品定量分析的要求 化学药物非临床药代动力学研究技术指导原则 化学药物临床药代动力学研究技术指导原则 化学药物制剂人体生物利用度和生物等效性研究技术指导原则 9012　生物样品定量分析方法验证指导原则;国外相关指导原则 FDA：Guidance for Industry Bioanalytical Method Validation EMEA：Guideline on bioanalytical method validation;CFDA;EMEA;FDA;1. 范围 测定对象确定——生物基质中的药物浓度。 适合于非临床或临床试验样品实际分析的基本要求。 规定部分验证或交叉验证的适用范围。;2.1 完整验证 每个物种和每种基质进行完整验证。 难以获得相同基质，可以采用适当基质替代并给出理由。 完整验证包括：选择性、定量下限、响应函数和校正范围、准确度、精密度、基质效应、分析物的稳定性。;对照标准物质 对照标准物质的溶液+空白生物基质=校正标样 色谱法需要使用内标 对照标准物质需要提供： 分析证书、储存条件、失效日期、批号。 内标： 证明可适用，即无干扰。;区分目标分析物和内标与基质的内源性组分或样品中其他组分（代谢产物或共同服用的其他药物）。 6个不同来源的空白基质分别分析。 如有干扰，则干扰的峰面积小于LLOQ的峰面积的20%，小于内标峰面积的5%，可以接受。 ;在新药研究中需要按照要求在报告上提供相应数量的典型色谱图;如果待测组分是内源性成分？ ;如果待测组分是内源性成分？ ;如果存在外源性非测定成分影响？（例如中西药合并给药）;C. Wang et al. / J. Chromatogr. B 854 (2007) 48–56;前一针进样的残留对后一针进样的干扰。 一般多发生在高浓度进样后。 先进一针工作曲线的最高浓度，再紧接着进一针空白，观察是否有干扰，干扰峰面积小于LLOQ的峰面积的20%，小于内标峰面积的5%，可以接受。 如干扰，需要消除。;犬血浆中的盐酸克伦特罗的测定 ;能够被可靠定量的样品中分析物的最低浓度，具有可接受的准确度和精密度。 是标准曲线的最低点。 应该满足预期的浓度与实验目的。 准确度应在标示值的+/-20%范围内。 变异系数不得超过20%。;指定浓度范围内评价仪器对分析物的响应程度。 制备各个浓度的校正标样——基质相同。 每个分析批都应该有一条标准曲线。 6个校正浓度水平+空白样品+零浓度样品（空白+内标） 验证中需要评价3条标准曲线。 回算浓度应该在标示值的+/-15%，LLOQ+/-20%之内 回算浓度偏差=【（实测值－标示值）/标示值】X100% ;当线性范围较宽的时候，推荐采用加权的方法对标准曲线进行计算，以使低浓度点计算得比较准确。即低浓度点满足回算的要求。 ;准确度是指在确定的分析条件下，测得的生物样品浓度与真实浓度的接近程度。 校正标样——绘制工作曲线。 质控样品——评估准确度。 用4个浓度评价 定量下限 低浓度QC～～LLOQ的3倍以内 中浓度QC～～标准曲线中间浓度 高浓度QC～～标准曲线上限的75% ;批内准确度：1个分析批进行验证，每个浓度至少5个样品。 批间准确度：3个分析批进行验证，且至少进行两天，每个浓度至少5个样品。;分析物重复测定的接近程度。 测量值的相对标准偏差（变异系数）。 采用与准确度验证相同的分析批结果进行计算。 4个浓度验证。 定量下限变异系数不超过20%。 其余浓度点不超过15%。;;判断样品稀释后是否会影响定量的准确度和精密度。 配制高于定量上限浓度的样品。 用空白基质稀释该样品。 每个稀释因子至少测定5个数据，其准确度和精密度应在+/-15%之内。;质谱方法应该考察基质效应。 采用至少6批来自不同供体的基质，不可以合并基质。 选择高、低两个质控浓度进行。 求算不同浓度的基质因子。 计算内标归一化基质因子=分析物基质因子/内标基质因子 变异系数15% ;空白血浆沉淀蛋白 ＋ 标准溶液 浓度C ;J. Wen et al. / J. Chromatogr. B 867 (2008) 153–159;选择低浓度和高浓度质控样品进行验证。 预处理后或者在相应条件储存后立即分析得到该条件下数据。 制备随行标准曲线，求算上述质控样品的浓度，与标示浓度比较，均值应与标示浓度的偏差在+/-15%之内。