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梅毒ELISA诊断试剂盒及相关抗原 天津晨星生物工程有限公司 2010.8.16 梅毒介绍 试剂盒开发常用抗原 TP15 TP47 TP17 TmPA（44.5） 重组表达抗原 梅毒简介 梅毒是由梅毒螺旋体（苍白螺旋体）（Treponema pallidum，TP）引起的一种临床表现复杂多变的全世界流行的性传播疾病。TP细胞末端尖，有外膜（含丰富脂类和少量蛋白质）、胞浆膜（肽聚糖层）和原浆外周鞭毛（又称内鞭毛）。 螺旋体是一种细长、柔软、弯曲成螺旋状、运动活泼的原核细菌，在自然界和动物体内广泛存在，种类很多，多数是非致病的。致病性螺旋体有三属： 细螺旋体属（Leptospira），又称钩端螺旋体，可致钩端螺旋体病； 疏螺旋体属（Borrelia），如回归热螺旋体（引起回归热）和伯氏螺旋体（引起莱姆病）； 密螺旋体属（Treponema），包括Tp（引起梅毒）、品他螺旋体（引起品他）、雅司螺旋体（引起雅司）和地方性梅毒螺旋体（引起地方性梅毒）。 梅毒简介 TP经皮肤和淋巴结进入血液后，几乎可侵犯人体各器官，造成多器官损害，还可通过胎盘传给下一代，危害极大。人类是其唯一的天然宿主，也是其传播的媒介。感染TP后，由于TP与宿主之间的相互作用，临床上梅毒表现为显发症状和潜伏状态交替出现，病程可持续很长，症状的轻重、发病的时间和早晚亦因人而异，不全相同，甚至可自然痊愈。因此，诊断梅毒不仅需要丰富的临床经验，还需要直接或间接发现和证明人体内TP的存在，即进行微生物学检测和血清学试验。 TP的基因组是有1139457bp组成的环状DNA，G+C的含量为52.8%，有1041个开放阅读框（ORFs），每个ORF平均为1032bp，代表92.9%的TP DNA，55%的ORF有生物学功能。 各种蛋白质的平均分子量为3.78kd。 梅毒简介 迄今，已有许多实验证实47-、17-和15kd TP脂蛋白（Tpp47、Tpp17和Tpp15）具有高度免疫原性，并存在于梅毒感染的各个时期。 其中Tpp47和Tpp15高度保守，是其他3中致病性密螺旋体如雅司螺旋体、品他螺旋体和地方性梅毒螺旋体的同族抗原，还可能是诊断先天梅毒最有用的抗原，尤其是伴有HIV感染的梅毒患者，当血中抗TP抗体低于普通梅毒患者时，仍能检测到抗Tpp47抗体。在非致病性螺旋体如Tp-Reiter和其它腐生性螺旋体中未发现Tpp47和Tpp15。 Tpp17可能是最可靠最特异的抗原标志。 因此，Tpp47、Tpp17和Tpp15这3种脂蛋白抗原在建立梅毒血清学诊断方法中具有重要的意义。 梅毒简介 Tp-Nichols可通过接种兔睾丸繁殖传代保持毒力，但不能长期在体外培养，一般体外培养1周左右即丧失活力，此时为腐生性螺旋体Tp-Reiter。 血清学诊断梅毒常用方法荧光螺旋体抗体吸收实验（FAT-ABS），梅毒螺旋体血凝实验（TPHA）等，此类方法虽然具有较强的特异性和敏感性，但是由于这些方法使用完整的梅毒螺旋体作为抗原，研究和诊断用的TP是以TP感染兔睾丸获得，这种方法花费大、获得TP量少，纯度不够（混有宿主蛋白），与其他病原微生物存在交叉反映，因此假阳性也时有发生。 梅毒简介 克隆技术发展，使得重组抗原越来越多地应用于酶联免疫吸附实验。 1996年，Gerber等对梅毒螺旋体抗原进行了较为全面的研究，他们用PCR法扩增了编码梅毒螺旋体抗原的DNA，并插入大肠杆菌中使其表达，产生为了TPN17、TPN29-35、TPN44.5（TmpA）、TPN47、TPN35、TPN39梅毒螺旋体抗原，并用ELISA对合成的抗原进行检测，结果发现TPN17、TPN47和TPN44.5的抗体滴度最高，而且这三种抗原联合起来的敏感性要比单一任何一种抗原的敏感性要高。 1998年，Young合成了TPN15、TPN17和TPN47，并将这三种重组抗原联合起来设计了快速诊断试剂盒Syphilis-Fast，其敏感性和特异性均高于传统的VDRL和TPHA血清学诊断方法。 梅毒简介 设计思想：从TP基因组DNA中克隆编码Tpp47、Tpp17和Tpp15抗原的tpp47、tpp17和tpp15基因片段，诱导表达rtpp47、rtpp17、rtpp15、TmPA及相关嵌合抗原，评价这些重组抗原与梅毒血清和正常人血清的反应原性。 TP15 15kd脂蛋白首先由Hensel等1985年分离鉴定，其分子量为15.654kd，PI值为7.34。它在TP膜蛋白中的含量相对较少，是一种天然梅毒感染和实验梅毒感染的主要免疫原。 在兔免疫模型中，能导致强烈的体液免疫、细胞免疫和抵抗感染后期的梅毒螺旋体再感染。因此认为TP15在保护性免疫中起着重要作用。Young等报道在梅毒感染各期，甚至晚期潜伏梅毒均可能检测到强的抗15