病毒潜伏膜蛋白在慢性萎缩性胃炎伴肠化黏膜中的表达及意义解读课件.pptVIP

EB病毒潜伏膜蛋白1在慢性萎缩性胃炎伴肠化黏膜中的表达及意义 姓名：张廷光 方向：消化系病 导师：刘希双 教授 主要内容 研究背景 实验过程 实验结果 讨论 结论 攻读学位间取得的成果 致谢 研究背景 慢性萎缩性胃炎 是我国比较常见的胃粘膜病变，常伴不同程度的肠上皮化生，是一种重要的胃癌前疾病。随着对胃癌研究的不断深入，生物因素在胃癌发生、发展过程中的作用越来越受到重视，而作为生物致癌因素的EB病毒近年来已成为胃癌发病方面的研究热点，在过去十年里，EB病毒在胃癌发病过程中的作用不断被发现新的证据。 EB 病毒与多种恶性肿瘤密切相关，已被WHO认定为Ⅰ类致癌病原体，在人体内常处于潜伏感染状态，可以致机体表达多种与其潜伏感染密切相关的病毒蛋白，其中潜伏膜蛋白1（LMP1）是其潜伏感染的主要指标，也是唯一被公认的能够促进细胞癌变和转移的具有瘤基因功能的EBV编码的基因产物。 研究背景 研究背景 越来越多的研究结果表明，EBV感染与胃癌发生有关，但其具体机制目前尚不清楚。 EBV相关性胃癌在EBV相关恶性肿瘤中占重大比重，因此研究其在胃癌发病过程中的作用具有极其重要的意义。 检测EBV潜伏膜蛋白1在作为癌前疾病的慢性萎缩性胃炎伴肠化黏膜中的表达，探讨其在胃癌发生、发展过程中的作用。 研究目的 144例胃粘膜标本全部取自2012年6月— 2013年6月期间来我院检查和治疗的病人 45例CSG、63例CAG伴肠化黏膜标本均取 自来我院行胃镜检查的病人 36例胃癌标本均取自我院外科手术病人 研究对象 研究对象 入选标准 慢性浅表性胃炎纳入标准: ① 胃镜下表现:胃窦黏膜 红白相间，以红为主， 黏膜较光滑。 ②取活检病理学诊断： 慢性浅表性胃炎。 研究对象 CAG 伴肠化纳入标准： ① 胃镜下表现：胃窦粘膜 粗糙，粘膜红白相间，以 白为主，粘膜变薄，粘膜 下血管网清晰可见。 ②病理学诊断：CAG伴肠化。 研究对象 3.胃癌纳入标准： ①术前胃镜检查，取活检行病理学诊断示胃腺癌。 ②术后切除病灶送检病理学诊断结果为胃腺癌。 研究对象 CSG及CAG伴肠化黏膜标本采集：胃镜直视下用活检钳于胃窦处取活检组织2-3块 胃癌组织采集：于我院病理科取胃癌患者送检胃癌组织2-3块 标本取完立即甲醛固定，12h内石蜡包埋。 免疫组织化学SP试剂盒(上海金杉生物科技有限公司) LMP-1单克隆抗体(即用型)（上海金杉生物科技有限公司） 脱石蜡剂：二甲苯 （dimethylbe nzene） 复染剂：苏木素(haematoxylin) 磷酸盐缓冲液（PBS） 无水乙醇（absolutea lcohol） 双氧水(aquae hydrogeniidioxidi)以及载玻片等。 试剂及来源 石蜡包埋机（Thermo ELECTRON CORPORATION SHAN DON HISTOCENTRE3） 冷冻工作台（孝感泰康达医疗设备有限公司制造） 化蜡机（SHAN DON PARA TRIMMER） 切片机(LEICA RM2135 GERMANY) 烤片机（LEICA HI1220 GERMANY） 恒温培养箱（山东潍坊精鹰医疗器械有限公司） BX51全自动显微照相系统（日本OLYMPUS公司） 显微镜（V-TV1X-2日本OLYMPUS公司） 日本OLYMPUS EVIS240系列电子内镜 Pentax公司3500系列电子内镜 Wilson-cook胃镜活检钳 主要设备及来源 石蜡切片梯度脱蜡水化 胰酶抗原修复 过氧化氢溶液阻断内源性过氧化物酶的活性 滴加一抗、二抗 DAB显色 苏木素复染 二甲苯透明，中性树胶封片，显微镜下观 PBS溶液代替一抗作为阴性对照，结果为阴性，无显色反应 实验结果：阳性反应为棕黄色 免疫组化主要步骤 以细胞染色程度及范围做以下评分 : ①着色强度：无着色为0，浅黄色1，棕黄色2，棕褐色3。 ②阳性细胞面积:无着色为0，着色面积1/3为1，1/3~2/3为2，2/3为3，两项结果相加≥3为阳性。 结果判定 采用 S