细胞和显微技术学实验.pptVIP

细胞与显微技术学实验 河南师范大学 生命科学实验教学中心 实验一特殊显微镜的使用及其观察 实验二荧光显微镜的使用及其观察 实验三DNA的Feulgen染色法 一、实验目的 掌握Feulgen反应的基本原理 实验四高碘酸-希夫反应（PAS反应） 一、实验目的 掌握PAS反应的基本原理 实验五 RNA显示方法与制片技术 实验六小鼠肝细胞的分离与线粒体观察 一、实验目的 掌握小鼠解剖操作技术 三、实验原理 PAS反应的基本原理： 利用强氧化剂使多糖产生游离的醛基，醛基和Schiff试剂结合，形成紫红色的化合物。因此在有多糖的部位，就会呈现除紫红色阳性反应。 四、实验步骤 取固定的小鼠肝细胞，涂片，450C烘烤30min； 复水1min； 氧化，入 Lillies 氧化剂氧化10 min； 水洗，流水洗10 min； 蒸馏水稍洗； 置Schiff试剂中室温染色30min左右； 分色漂洗，亚硫酸盐溶液洗3次，总时间为3 min; 自来水冲洗1min； 显微镜观察。 五、总结与思考 简述PAS反应的原理及意义。 本实验的关键步骤及注意事项。 画出糖类在细胞中的分布。 模块二、细胞化学技术与免疫荧光染色 一、实验目的： 学会显示RNA的细胞化学方法，了解RNA在细胞内分布。 二、实验原理： 甲基绿—哌洛宁对DNA和RNA有选择性的染色效果。碱性的甲基绿-哌洛宁混合染料处理细胞后，由于DNA、RNA对染料具有的亲和力不同， 而使这两种染料对两类核酸具有了选择性。 DNA被甲基绿染成绿色，RNA被哌洛宁染成红色， 这样就能使细胞中两种核酸分布显示出来。 三、器材与试剂 1、 器材：显微镜、载玻片、盖玻片、烧片、培养皿、吸管、镊子、刀片或切片机、分液漏斗等. 2、Unna试剂： 1) 甲基绿的精制：先配制2％甲基绿水溶液，置于分液漏斗 中 ，然后加氯仿洗涤数次，弃除氯仿，反复多次直至氯仿层中不显紫色，水层备用。 2）派罗宁的精制：先配制5％水溶液，置于分液漏斗中，用 氯仿洗涤数次，待氯仿不显红色为止，弃除氯仿水层备用。 3) 0.2mol/L醋酸缓冲液，pH4.8 (0.2mol/L醋酸 40ml+0.2mol/L醋酸60ml)。 4) 甲基绿—派罗宁溶液：1ml2％甲基绿水溶液+1.75ml派罗 宁水溶液+pH4.80.2mol/L醋酸缓冲液25ml+水25ml，混合液可保存一周。 四、实验方法： 1、肝细胞制片观测 1） 取固定后的肝细胞悬液滴在载玻片上，45～ 50oC 干烤20～ 30分钟。 2） 复水1分钟。 3）? Unna试剂染色30分钟，吸去染液。 4）?分色：冷蒸馏水（4oC）1秒。 5）?显微镜下观察。 2、根尖或表皮细胞制片 五、实验报告： 1 说明Unna试剂染色法的基本原理。绘图示DNA和 RNA的亚细胞定位。 2 谈一下你对这次实验的评价或者建议。 六、注意事项： 1、染剂的纯度是关键。 2、掌握好分化脱色程度，使分色效果更明显。 综合性实验 模块五、动物细胞的分离与培养 * * 模块一、细胞的形态结构观察与各种显微镜技术 一、实验目的： （1）了解暗视野显微镜、相差显微镜工作原理 （2）掌握视野显微镜、相差显微镜和使用方法。 二、实验用品 和实验材料 暗视野显微镜、倒置显微镜、相差显微镜、黑纸片、剪刀、圆规、镜油、 口腔黏膜上皮细胞、活细胞临时装片。 三、实验原理与方法 1、暗视野显微镜 1.1?????原理和结构特点 普通光学显微镜的的照明光线直接进入视野，视野明亮,活细胞不经染色很难看清细胞内部结构。而暗视野显微镜则利用特殊的聚光器实现斜射照明，给样品照明的光不直接穿过物镜，而是由样品反射或折射后再进入物镜（图 2-9），因此，整个视野是暗的，而样品是明亮的。在暗视野显微镜中由于样品与背景之间的反差增大，可以清晰地观察到在明视野显微镜中不易看清的活菌体等透明的微小颗粒。暗视野法主要用于观察活细胞。 1.2 ? 制作中央遮光板 普通显微镜只要聚光器是可以拆卸的，支架的口径适于安装暗视野聚光器，即可改装成暗视野显微镜。在无暗视野聚光器时，可用厚黑纸片制作一个中央遮光板，放在普通显微镜的聚光器下方的滤光片框上，也能得到暗视野效果。保存好各自制作的中央遮光板，以便在后面的实验中使用。 ?  1.3 使用方法 ? 1）．把暗视野聚光器装在显微镜的聚光器支架上。 ? 2