琥珀酸脱氢酶 大鼠琥珀酸脱氢酶(SDH)说明书.docVIP

琥珀酸脱氢酶 大鼠琥珀酸脱氢酶(SDH)说明书 大鼠琥珀酸脱氢酶（SDH）酶联免疫分析（ELISA） 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定大鼠组织匀浆及相关液体样本中琥珀酸脱氢酶（SDH）的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠琥珀酸脱氢酶（SDH）水平。用纯化的大鼠琥珀酸脱氢酶（SDH）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入琥珀酸脱氢酶（SDH），再与HRP标记琥珀酸脱氢酶（SDH）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的琥珀酸脱氢酶（SDH）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠琥珀酸脱氢酶（SDH）的活性浓度。 试剂盒组成： 试剂盒组成 说明书 封板膜 密封袋 酶标包被板 标准品：90μmol/L 标准品稀释液 酶标试剂 样品稀释液 显色剂A液 显色剂B液 终止液 20倍浓缩洗涤液 48孔配置 1份 2片（48） 1个 1×48 0.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 3 ml×1瓶 3 ml×1瓶 3 ml×1瓶 3 ml×1瓶 3ml×1瓶 20ml×1瓶 96孔配置 1份 2片（96） 1个 1×96 0.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 6 ml×1瓶 6 ml×1瓶 6 ml×1瓶 6 ml×1瓶 6ml×1瓶 30ml×1瓶 保存 2-8保存 2-8保存 2-8保存 2-8保存 2-8保存 2-8保存 2-8保存 2-8保存 2-8保存 样本处理及要求： 1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分 钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20保存，但应避免反复冻融. 7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标 准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为60μmol/L，40μmol/L ，20μmol/L，10μmol/L，5.0μmol/L）。 2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样 品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 温育：用封板膜封板后置37温育30分钟。 4. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。 5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此 重复5次，拍干。 6.