微生物检验教学课件（扬州大学）第八节_金黄色葡萄球菌检验.ppt

第八节 金黄色葡萄球菌检验 由金色葡萄球菌肠毒素引发的中毒暴发事件，近年来首推2000年日本“雪印奶粉”事件，14000多人受感染。 分 类 1、过去曾根据菌落色素不同分为三个种： 金黄色sta. 柠檬色sta. 白 色sta. 2、1974年分类系统：依据细胞组成、是否产生血浆凝固酶、分解甘露醇的能力，有无SPA与DNA酶等性状，将其分： 金黄色sta. 表 皮sta. 腐 生sta. 3、最新分类系统：共分28个种，其中23个种为凝固酶阴性，从动物分离的常见的有14种（其中凝固酶试验、DNA酶试验阳性有3种） 形态特征 葡萄球菌呈球状，直径为0.5~1.5um； 固体培养基上生长的细菌呈典型的葡萄串状排列； 但在脓汁或液体培养基中常为双球状或短链状排列 无鞭毛、无芽胞，一般不形成荚膜。G+，但衰老、死亡或被白细胞吞噬后的菌体常转为G－。 （二）培养特性 葡萄球菌对营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧菌。致病菌株最适生长温度为37℃，最适pH7.4。 1、在普通琼脂平板上24~48小时，形成：光滑、湿润、隆起的边缘整齐、不透明的圆形菌落，直径1~2mm，也有的达3~4mm，在有氧环境中可产生色素，在无氧环境中不产生色素。 2、在血琼脂平板上形成较大的菌落，多数致病菌株能形成β溶血。 3、在普通肉汤中生长24小时，呈均匀混浊，管底有少量沉淀，培养2~3天后可在培养基表面形成很薄的菌环。 4、大多数致病菌株能耐高浓度NaCl，即可在含10~15%NaCl培养基中生长，故对严重污染的病料可用却蒲曼琼脂分离细菌。 （三）生化特性 多数葡萄球菌能分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，产酸不产气; 其他一些重要特征 金色葡萄球菌竞争能力差，由于食品中除金色葡萄球菌外，还有其他腐生菌的存在，对金色葡萄球菌的生长会产生拮抗作用。 葡萄球菌为耐盐菌，在10?15%的盐浓度下仍可生长繁殖，因此在一些腌制的肉中此均仍有繁殖的可能性。 对热比较敏感，巴氏消毒可以杀死牛奶中金葡萄。 对人的致病作用 发挥致病作用的主要为肠毒素，该毒素耐热强。 引起食物中毒的主要为奶制品、熟肉类，以及含淀粉较高的米饭、糕点等。 食物中毒潜伏期短，一般在食后2?6小时发生比较剧烈的呕吐，也可伴有腹痛及腹泻，体温不高，有的则表现为流涎、恶心、干呕及腹部痉挛等。经1?2天后，多可自愈，很少引起死亡等。 选择性培养基的制作 金黄色葡萄球菌的选择性培养基多根据其耐盐，在有氧、无氧情况下均能发酵甘露醇产酸等特性而设计的。 常用的有却莆曼琼脂平板（形成黄色针尖状细小菌落； ）、亚碲酸盐琼脂平板（长成黑色菌落）等。 附 ：却甫曼琼脂 牛肉膏 5g 示蛋白胨 10g 甘露醇 10g 氯化钠 75g 琼脂 15g 水 1000 ml， pH 7.4 加入0.4%的酚红溶液6ml，分装，121℃，15min，灭菌 Baird-Parker氏培养基 成分 胰蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 酵母膏 1g 丙酮酸钠 10g 甘氨酸 12g 氯化锂 5g 琼脂 20g PH值7.3 增菌剂的配法 30%的卵黄盐水50ml与除菌过滤的1%亚碲酸钾溶液10ml混合，保存于冰箱内。 制作 将Baird-Parker氏培养基高压灭菌并冷却至50℃，加入增菌剂5%，充分摇匀后，倾注平板。培养基应是致密不透明的，使用前在冰箱内储存不得超过48h。 金黄色葡萄球菌在 Baird-Parker氏培养基上为圆形、光滑凸起、湿润、直径为2-3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一浑浊带，在外层有一透明带。 增菌及分离培养 吸取5ml 上述混悬液，接种于7.5%氯化钠肉汤或胰酪胨大豆肉汤50ml培养基内，培养24h。 再转种于血平板和Baird-Parker平板，培养24h，挑取血平板上呈金黄色（有时为白色）菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。 胰酪胨大豆肉汤 胰酪胨（或胰蛋白胨） 17 g 植物蛋白胨（或大豆蛋白胨） 3 g 氯化钠 100 g 磷酸氢二钾 2.5 g 葡萄糖 2.5 g