抗原抗体反应的应用免疫学导论PPT课件.ppt

抗原抗体反应的应用;免疫沉淀和免疫凝集;溶液中的沉淀反应;环状沉淀试验原理;方法： 将适当浓度的抗体混于琼脂（0.8%~1%）中，琼脂凝固后，打成小孔，加入抗原，抗原由小孔开始向周围扩散，并在小孔周围合适的位置形成沉淀。 ;?影响因素;双向免疫扩散;染色标本图;结果分析： 抗原或抗体是否存在； 抗原或抗体的纯度：若在两孔内有两对或两对以上的抗原抗体系统，就能产生相应数量的分离的沉淀线。 抗原或抗体相对浓度：抗原浓度越高，形成的沉淀线距离抗原孔越远，抗体浓度越高，形成的沉淀线距抗体孔越远； 抗原或抗体相对分子量：抗原或抗体在琼脂内的扩散受分子量影响，分子量大者扩散速度慢，扩散圈小，局部浓度高，因此形成的沉淀圈弯向分子量大的一方，若二者分子量相等，则沉淀线呈直线；;抗原性质：观察两个邻近孔的抗原与抗体所形成的两条线是交叉抑或相连，可用来判断该两抗原是否有共同成分。同样的纯抗原a放在两个邻近的孔中，对应抗体放在中央孔中，两条沉淀线在其相邻的末端会互相连接和融合；若两个不同的抗原a和b，则两线互相交叉；若两个抗原有部分相同成分a和ab，则两线除有相连部分以外还有一伸出部分。 滴定抗体效价：固定抗原浓度，稀释抗体，出现沉淀线的最高稀释度为该抗体的效价。 ;抗原、抗体相对分子量;抗原决定簇部分相同;双向琼脂扩散试验的应用;电泳条件下的沉淀反应;血清免疫电泳; ;根据沉淀线的位置及粗细，可分析样品中的抗原含量； 根据蛋白质的电泳迁移率，免疫特性及其它特性，可以确定该复合物中含有某种蛋白质。;火箭电泳;注意要点： 选择无电渗或电渗很小的琼脂糖，否则火箭形状不规则； 若火箭顶部形状呈不清晰的云雾状，提示电泳时间不够，未到达终点； 作IgG定量时，由于琼脂中的抗IgG抗体也是IgG，免疫反应中的抗原抗体性质相同，由于电渗作用影响了待测IgG的泳动，火箭峰呈纺锤状。为了抵消电渗作用，可用甲醛使样本IgG上的氨基甲酰化，使本来带两性电荷的IgG只带负电荷，加快泳动速度，出现伸向阳极的火箭峰。 火箭电泳的检测灵敏度在μg/ml水平。可采用竞争法放射自显影技术来进行火箭免疫电泳，灵敏度可达ng/ml。 ;对流免疫电泳;Ag;免疫共沉淀;免疫共沉淀原理图解;关键因素 1. 抗原的丰富度 2. 抗体的结合能力 3. 蛋白质和抗体的 可接触性 ;免疫凝集; 最常见的免疫凝集反应是红细胞凝集，即血凝反应。 血凝反应的抗体识别的抗原可以是红细胞表面的天然抗原，如血凝鉴定试验；也可以通过交联将红细胞连接上其他抗原，如早期的HBsAg血凝试验。;细菌的血凝试验常用来 对细菌进行鉴定与分型，如沙门菌鞭毛抗原的分析等。 免疫凝集试验虽然简便，但是受反应灵敏度的限制，在实际应用越来越少。; 女科学家 R.Yalow（美,1921~）1950’末 发明（胰岛素），1977年获诺贝尔医学奖 1. 基本原理 （1）竞争结合分析：Ag + Ab ? AgAb *Ag + Ab ? *AgAb （2）IRMA（免疫放射分析）： 2. 常用标记核素： （1）125I： γ 射线，半衰期 60 天 （2）3H： β 射线，半衰期 12.3 年 3. 测量仪器 （1）γ 计数仪 （2）β 液闪仪;一、放射免疫分析（ RIA ）;4. 基本试剂;（2）标记物;b. 标记方法：;（3）特异性结合抗体; c. 抗体的纯化; 非放射性免疫标记方法由于比放射性标记更为简便，同时又保持了灵敏快速的特点而得到了发展，其中酶标记免疫试验是广泛使用的方法。 用于标记酶的种类也越来越多，常用的有碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶、β-半乳糖苷酶和脲酶。;酶免疫试验法有两类：;ELISA有直接发、间接法及夹心法等不同反应方式;间接法;夹心法;特点： 非竞争结合反应 常用于抗原的检测 适用于分子中具有至少两个抗原决定簇的多价抗原，而不能用于小分子半抗原的检测 所用两种抗体分别针对同一个抗原分子的不同抗原决定簇 ;荧光与发光免疫分析;直接法;间接法;亲和标记免疫分析;免疫定位分析;抗原抗体反应的其他应用;一种高效、简便的样品前处理技术，大大简化了提取、净化、衍生化等复杂的前处理过程，在食品分析中属于痕量检测，检测线非常低（达10-12数量级）。 ;影响亲和作用的因素;免疫亲和色谱的特点;免疫亲和色谱的特点;免疫亲和色谱的特点;免疫生物传感器与抗体芯片;抗体芯片;由于细胞蛋白质种类数量庞大，通常无法得到所有蛋白质的抗体，目前的商用抗体芯片大多数为特定蛋白谱，如特定肿瘤蛋白谱，特定信号转导通路蛋白谱或某些基因的表达蛋白谱等。 ;TH