经前烦躁障碍（PMDD）肝气郁证大鼠模型制备与鉴开题报告.pptVIP

Shandong University of TCM 山东中医药大学 山东中医药大学 Shandong University of TCM 汇报人： 导 师： 教授 经前烦躁障碍（PMDD）肝气郁证大鼠模型制备与鉴定 选题背景、意义 课题目的 课题设计 课题特色 进度安排及经费预算 * 汇报内容 背景及意义 * 一 课题背景 检索近20年国内外相关文献显示： 国内以我们研究较为系统，前期侧重PMS肝气郁证大鼠和猕猴模型；近期探索PMDD肝气郁模型标准化； 国际上对PMDD及其亚型大鼠模型研究，不断更新；但迄今尚无确认的PMDD亚型和病证结合大鼠模型的报道。 Lofgren M及Smith SS等人的孕激素/雌激素撤退的PMS/PMDD模型，未能明确鉴别大鼠动情周期非接受期和接受期行为表型差异，距离PMDD临床原型差异过大，难以令人信服，有待进一步研究解决。 * 二 选题意义 建立PMDD肝气郁证病证大鼠模型：探索中医肝疏泄失常脑中枢微观机制和研发中药新药的迫切需求。 鉴定PMDD肝气郁病证模型大鼠动情周期“非接受期呈现病证表现，接受期症状消失”：确认模型属于该病证的关键，国际前沿PMDD亚型大鼠模型研究的关键。 建立 PMDD肝气郁证病证大鼠造模与评价规范：肝藏象现代教学科研与新药研发，将广为应用；中医病证结合模型，将走向国际前沿。 * 研究目的 * 目的一 鉴定出具备PMDD肝气郁病证属性的大鼠模型 （1）确认该大鼠模型符合PMDD诊断首要标准：动情非接受期（相似于经前期）“症状出现”；接受期（相似于经行后卵泡期）“症状减低消失”。 （2）确认该大鼠模型“症状出现”分别模拟出肝气郁证的“临床表现”特点。 以严格科学证据，证明该病证大鼠模型属于PMDD肝气郁病证大鼠模型。 * 目的二 建立起PMDD肝气郁病证大鼠模型造模与评价的技术规范。 通过该病证大鼠模型标准化研究，尤其经过专家论证和第三方客观检验，最终形成具有专家共识的PMDD肝气郁证大鼠模型造模和评价技术规范。 * 研究设计 * 一 研究内容 证明雌性大鼠的悬浮不动时间有动情周期依赖性，即动情周期非接受期悬浮不动时间较接受期显著延长。 证明以上“模型”大鼠行卵巢切除术后上行为表型消，即动情周期接受期和非接受期悬浮不动时间无统计学差异。 对卵巢切除大鼠进行外源性激素诱导人工周期，上病证行为表型又出现。 对内容三中诱导人工周期大鼠“模型”进行氟西汀（病治疗药物）和舒郁胶囊（证治疗药物）干预，观察悬浮不动时间的动情周期依赖性消失现象。 * 二 技术路线 * 健康wistar雌性大鼠，120-150g 阴道图片法筛选动情周期规律的大鼠 FST动情周期依赖性验证 出现动情周期依赖性 未现动情周期依赖性 模 型 组 空 白 组 FST、ORT、EPM、SPT FST、ORT、EPM、SPT 切除卵巢 外源激素诱导人工周期 二 技术路线 * 模型组 对 照 组 氟 西 汀 舒 郁 组 FST、ORT、EPM、SPT 空白组 取材，指标检测 数据处理分析 整理论文 三 研究方法 FST及行为检测 * 模型组为FST悬浮不动时间具有动情周期依赖性，即：动情间期1期有最长的悬浮不动时间而动情期有最短或没有悬浮不动时间。而动情周期间期1期有很短的悬浮不动时间，接受期有最短或没有悬浮不动时间的为正常组。 三 研究方法 外源激素诱导 通过皮下注射雌激素，诱导正常的动情周期。 第一天中午12：00（0h）每只大鼠皮下注射苯甲酸雌二醇0.5mg/0.1ml麻油；第二天（接受期）20：00（32h）每只大鼠皮下注射雌二醇0.5mg/0.1ml麻油，第三天8：00（44h）皮下注射孕酮0.5mg/0.1ml麻油，第四天即为间期1期。 * 时间 0h 32h 44h …… 激素 苯甲酸雌二醇 雌二醇 孕酮 0 …… 三 研究方法 药物干预 将模型组大鼠分成对照组、氟西汀组、舒郁胶囊组。给药2个周期（第一个间期1期到第三个间期1期，共9天）。最后一次给药后进行ORT、EPM、FST。期间保持实验三种激素注射。 动物按照药量体质量比1ml/100g给药，各组大鼠于每天上午8：30同时灌胃给药。给药9天，模型组对照组与空白对照组给以同等量的纯水。氟西汀组灌胃用氟西汀片，给药量为2.7mg·kg-1·d-1；舒郁组大鼠灌胃给予舒郁胶囊，给药量为267mg·kg-1·d-1。 * 三 研究方法 指标检测 行为检测结束后取大鼠脑区及外周血，检测各组脑内前额叶皮层、海马、杏仁核四氢孕酮（ALLO）、γ-氨基丁酸（GABA）、去甲肾上腺素（NE）、5-羟色胺（5-HT）含量变化，外周血清ALLO、5-HT、NE含量变化。 * 四 可行性分析 前期基础深厚