第六章_微生物的生长及控制 应用微生物技术（于淑萍）（二版） 教学课件.pptVIP

第六章 微生物的生长及控制 第二节 微生物的生长规律 4.衰亡期 其他名称：衰老期 特点： ①细胞死亡数增加，死亡数大大超过新增殖的细胞数，群体中的活菌数目急剧下降，出现“负生长”。 ②细胞内颗粒更明显，细胞出现多形态、畸形或衰退形，芽孢开始释放。 ③因菌体本身产生的酶及代谢产物的作用，使菌体死亡、自溶等，发生自溶的菌生长曲线表现为向下跌落的趋势。 衰亡期比其他各时期时间长，它的长短也与菌种和环境条件有关。 产生原因：生长条件的进一步恶化，使细胞内的分解代谢大大超过合成代谢，继而导致菌体的死亡 第二节 微生物的生长规律 三、连续培养 分批培养（batch culture） ：将微生物置于一定容积的定量的培养基中培养，培养基一次性加入。不再补充和更换，最后一次性收获。 连续培养（continuous culture） ：在微生物培养的过程中，不断地供给新鲜的营养物质，同时排除含菌体及代谢产物的发酵液，让培养的微生物长时间地处于对数生长期，以利于微生物的增殖速度和代谢活性处于某种稳定状态。 第二节 微生物的生长规律 原理：当微生物在单批培养方式下生长达到对数期后期时，一方面以一定的速度流进新鲜培养基并搅拌，另一方面以溢流方式流出培养液，使培养物达到动态平衡，其中的微生物就能长期保持对数期的平衡生长状态和稳定的生长速率。 单批培养 恒浊法 恒化法 单批培养 连续培养 时间 连续流入 新鲜培养液 lg细胞数（个/ml） 连续培养 第二节 微生物的生长规律 连续培养技术——恒化培养 概念：以恒定流速使营养物质浓度恒定而保持细菌生长速率恒定的方法。 原理：通过控制某一种营养物浓度（如碳、氮源、生长因子等） ，使其始终成为生长限制因子，而达到控制培养液流速保持不变，并使微生物始终在低于其最高生长速率条件下进行生长繁殖。 特点：维持营养成分的亚适量，控制微生物生长速率。菌体生长速率恒定，菌体均一、密度稳定，产量低于最高菌体产量。 应用范围：实验室科学研究 第二节 微生物的生长规律 恒 化 培 养 器 第二节 微生物的生长规律 连续培养技术——恒浊培养 概念：通过调节培养基流速，使培养液浊度保持恒定的连续培养方法。 原理：通过调节新鲜培养基流入的速度和培养物流出的速度来维持菌浓度不变,即浊度不变。主要采用恒浊器，当浊度高时，使新鲜培养基的流速加快，浊度降低，则减慢培养基的流速。 特点：基质过量，微生物始终以最高速率进行生长，并可在允许范围内控制不同的菌体密度；但工艺复杂，烦琐。 使用范围：用于生产大量菌体、生产与菌体生长相平行的某些代谢产物，如乳酸、乙醇等。 第二节 微生物的生长规律 恒 浊 培 养 器 第二节 微生物的生长规律 恒浊器与恒化器的比较 实验室为主 不同生长速率的菌体 低于最高 恒定 有限制生长因子 培养基流速（外控制） 恒化器 生产为主 大量菌体或与菌体形成相平行的产物 最高 不恒定 无限制生长因子 菌体密度（内控制） 恒浊器 应用范围 产物 生长速率 培养基流速 培养基 控制对象 装置 第二节 微生物的生长规律 连续发酵 连续培养在生产上的应用，相对于单批发酵而言。 优点： ①高效，简化了操作——装料、灭菌、出料、清洗发酵罐等单元操作； ②自控：便于利用各种仪表进行自动控制； ③产品质量稳定； ④节约大量动力、人力、水和蒸汽，且使水、汽、电的负荷均衡合理。 缺点：菌种易于退化；易于遭到杂菌污染；营养物利用率低于单批培养。 连续发酵的生产时间受以上因素限制，一般只能维持数月- 1年。 第三节 微生物生长的测定 描述不同种类、不同生长状态的微生物生长情况，需选用不同的测定指标。 一、微生物细胞数目的检测法 直接法（血球计数板、比例计数法） 间接法（活菌计数法、液体稀释法、膜过滤法） 二、微生物生长量测定法 直接法（干重法，堆体积法） 间接法（比浊法，碳、氮含量法，其它生理指标） 第三节 微生物生长的测定 一、微生物细胞数目的检测法 1.直接法——血球计数板 原理：将1cm2×0.1mm的薄层空间划分为400小格，从中均匀分布地选取80或100小格，计数其中的细胞数目，换算成单位体积中的细胞数。 第三节 微生物生长的测定 优点：快速简便，还可以知道细胞的大小和形态特征 缺点：不进行特殊染色时，不能区分死菌与活菌，所 计为总菌数；不适于对运动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察； 换算公式： 每毫升原液中细菌数（cell / ml）=每小格平均细菌数X稀释倍数X4X106（血球计数板） 第三节 微生物生长的测定 2.间接法——比浊法 比浊法：样品中由于菌体细