第3节 氨基酸.pptVIP

一、蛋白质的化学组成 蛋白质(protein)是由许多氨基酸(amino acids)通过肽键(peptide bond)相连形成的高分子含氮化合物。 二、 蛋白质水解 蛋白质和多肽的肽键可被催化水解 酸/碱能将蛋白完全水解 酶水解一般是部分水解 ----C-C-C-C-COOH γ β α ----C-C-C-C(NH2)-COOH α-氨基酸 ----C-C-C(NH2)-C-COOH β-氨基酸 ----C-C(NH2)-C-C-COOH γ-氨基酸 大多数AA在中性pH时呈兼性离子状态: 除甘氨酸外，19种AA都具有旋光性。 除胱氨酸和酪氨酸外，其余AA都能溶于水。 四、氨基酸的分类 　 习惯分类方法 芳香族氨基酸：Trp、Tyr、Phe 含羟基氨基酸：Ser、Thr、Tyr 含硫氨基酸：Cys、Met 杂环族氨基酸：His 杂环族亚氨基酸：Pro 支链氨基酸：Val、Leu、Ile 　 几种特殊氨基酸 Gly：无手性碳原子。 Pro：为环状亚氨基酸。 Cys：可形成二硫键。 七、氨基酸的旋光性和光谱性质 （二）氨基酸的光谱性质 可见光区：无吸收 远紫外和红外区：都吸收 近紫外区（200—400nm）：Tyr/Trp/Phe 原因：-C=C-C=C-C=C-C=C- 八、氨基酸混合物的分离和分析 （二）分配柱层析 填充物为亲水性的不溶物质如纤维素、 淀粉、硅胶等，收集的组分用茚三酮 显色定量。 （五）离子交换层析 （七）高效液相层析 固定相支持剂颗粒细，表面积大； 采取高压，洗脱速度快。 Met侧链上甲硫基：强亲核基团与烃化试剂成锍盐 保护巯基 与二硫硝基苯甲酸发生硫醇-二硫化物交换 pH8.0时412nm最大光吸收 —分光光度法测定-SH Cys的巯基不稳定，易被氧化成二硫键 巯基在有痕量的金属离子如： Cu2+，Fe2+，Co2+或Mn2+时，易被氧化 Cys中的二硫键可被氧化剂（过甲酸）以及还原剂（巯基化合物）打开。 磺基丙氨酸 （一）AA的光学活性和立体化学 构成蛋白质的氨基酸除甘氨酸外，均含有不对称碳原子，所以除甘氨酸外，所有天然氨基酸含有一个手性?-碳原子，因此都具有旋光性。 构型：根据甘油醛构型确定D型和L型 1.根据甘油醛原则确定构型 2.自然界的氨基酸有两种构型，构型和旋光方向没有必然联系。 3.组成蛋白质的氨基酸都是L型，除甘氨酸外都有旋光性。L—AA 1、紫外吸收光谱 Trp 280nm Tyr 275nm Phe 257nm 蛋白质含量测定 280nm ２、核磁共振波谱 1946年美国科学家布洛赫(Bloch)和珀塞尔（Purcell）两位物理学家分别发现在射频（无线电波0.1～100MHZ,106～109μm）的电磁波能与暴露在强磁场中的磁性原子核相互作用,引起磁性原子核在外磁场中发生磁能级的共振跃迁,从而产生吸收信号,他们把这种原子对射频辐射的吸收称为核磁共振(NMR)。 ——利用AA成分分配系数的差异 （一）分配层析法的一般原理 { 层析系统 固定相 { 流动相 附着在固相上的液体 固体 按两相所处状态分： 气固层析 液固层析 固体 液液层析 液体 流动相 固定相 气液层析 液体 气体 与纸层析相似， 纸用其它高分子有机吸附剂代替 薄膜 将有适当粘度的固定相涂在薄板上 薄层 固定相装于柱内 固定相是液体，吸附在滤纸上，将样品点在纸上，用流动相展开 纸 柱 按操作形式分： 固定相只能与一种组分结合， ——分开其它无亲和力的组分 亲和 离子交换剂 亲和性不同 离子交换 固体 吸附能力不同 凝胶 多孔凝胶， 通过速度不同 液体 分配系数不同 分配 吸附 按层析原理分： 固定相 各组分对固定相 （三）纸层析 （四）薄层层析 2、不常见的蛋白质氨基酸 3 非蛋白质氨基酸 150多种 多是蛋白质中L型α-AA衍生物 有一些是β-，γ-，δ-AA 有些是D-型AA 鸟氨酸 瓜氨酸 （一）氨基酸的两性离子形式 晶体或水溶液中的主要存在形式 五、氨基酸的酸碱性质 （二）氨基酸的两性解离和等电点 等电点（pI）： 在某一PH值时，氨基酸所带的静电荷为零，在电场中既不向阴极移动，也不向阳极移动，此时氨基酸所处溶液的pH值称为该氨基酸的(等电点pI) 等电点（pI） pH pI aa “ - ” aa向正极移动 pH pI