第十八节 电泳-2.pptVIP

第六节、毛细管电泳（CE） 一、概述 1、高效毛细管电泳技术简介 毛细管电泳(capillary electrophoresis)又称高效毛细管电泳(high-performance capillary electrophoresis, HPCE)，是20世纪80年代中期问世的一种高效液相分离法，是经典电泳技术与现代微柱分离相结合的产物。是离子或荷电粒子以电场为驱动力,在毛细管中按其淌度或/和分配系数不同进行高效、快速分离的一种电泳新技术。 2、高效毛细管电泳技术基本原理 最基本的高效毛细管电泳仪器如图1所示： （3）1984年，Terabe发展了毛细管电泳的新分支-毛细管胶束电动色谱(MEKC) （4）1987年, Hjerten提出了毛细管等电聚焦(CIEF)。同年，Cohen和Karger发表了毛细管凝胶(CGE)的研究工作。到此为止，毛细管电泳所有传统分离模式全部诞生，标志着毛细管电泳技术的发展成熟。 （2） HPCE中电渗流的方向 电渗流的方向取决于毛细管内表面电荷的性质： 内表面带负电荷，溶液带正电荷，电渗流流向阴极； 内表面带正负电荷，溶液带负电荷，电渗流流向阳极； 石英毛细管；带负电荷，电渗流流向阴极 改变电渗流方向的方法： （1）毛细管改性 表面键合阳离子基团； （2）加电渗流反转剂 内充液中加入大量的阳离子表面活性剂，将使石英毛细管壁带正电荷，溶液表面带负电荷。电渗流流向阳极。 5、添加剂的影响 （1）加入浓度较大的中性盐，如K2SO4，溶液离子强度增大，使溶液的黏度增大，电渗流减小。 （2）加入表面活性剂，可改变电渗流的大小和方向； 加入不同阳离子表面活性剂来控制电渗流。 加入阴离子表面活性剂，如十二烷基硫酸钠（SDS），可以使壁表面负电荷增加，zeta电势增大，电渗流增大； （3）加入有机溶剂如甲醇、乙腈，使电渗流增大。 * * 图1 毛细管电泳基本仪器结构示意图 HV. 高压电源(0~30kV)； C. 毛细管；E. 电极槽；Pt. 铂电极；D. 在柱检测器；S. 样品； DA. 数据采集处理系统 样品在毛细管中的分离过程如图2所示： 分离过程： 电场作用下，毛细管柱中出现：电泳现象和电渗流现象 带电粒子的迁移速度=电泳+电渗流；两种速度的矢量和。 正离子：两种效应的运动方向一致，在负极最先流出； 中性粒子无电泳现象，受电渗流影响，在阳离子后流出； 阴离子：两种效应的运动方向相反。ν电渗流 ν电泳时,阴离子在负极最后流出,在这种情况下,不但可以按类分离,除中性粒子外,同种类离子由于受到的电场力大小不一样也同时被相互分离。 图2 毛细管电泳分离示意图 3、毛细管电泳的特点 由于毛细管具有良好的散热效能，允许在窄内径毛细管两端加上高达30kV的高电压，分离毛细管的纵向电场强度可达400V/cm以上，可以在很短的时间内达到很高的分离效率，具有以下特点： （1）分离速度快（高压、高电场强度） 在3.1min内分离36种无机及有机阴离子，4.1min内分离了24种阳离子 （2）分离效率高（N105~106） （3）运行成本低 （4）样品与试剂消耗量少（1~50nL） （5）可供选择的分离模式多，应用范围广 （6）分离一般在水溶液介质中进行 （7）方法简单，仪器自动化程度高 （8）环境污染小 表1 高效毛细管电泳与高效液相色谱性能比较 4、毛细管电泳简单历史 （1）1967年Hjerten首先报道了开管毛细管电泳，后来Virtanen和Mikkers先后分别在约200 ? m内径的玻璃或Teflon毛细管中进行电泳，这些是毛细管电泳的最初期工作。 （2）1981年，Jorgenson和Lukacs使用75 ?m内径100cm的玻璃毛细管在30kV的高电压下进行电泳，获得了数十万理论塔板数的高分离效率，使毛细管电泳技术有了突破性进展。 图3 常用几种型号的高效毛细管电泳仪 二、高效毛细管电泳仪器流程和主要部件 电压：0～30kV； 分离柱不涂敷任何固定液； 紫外或激光诱导荧光检测器； （可检测到：10-19～10-21 mol/L） 图 4 高效毛细管电泳流程图 图 5 高效毛细管电泳基本装置 1.高压电源 （1）0～30 kV