试验五蛙心灌流一目的要求1观察细胞外液离子成分的改变对心肌.PPT

实验五 蛙心灌流 一 目的要求 1、观察细胞外液离子成分的改变对心肌运动的影响。 二 实验器材 1、仪器与材料 电子计算机、生物机能实验系统、机械换能器。蛙类手术器械、铁架台、双凹夹保护电极、刺激器、恒温水浴箱、注射器 2、药品 林格液（任氏液）、0.65% NaCl 溶液、2% CaCl2 溶液、1% KCl溶液、1:10000 溶液、1:10000 乙酰胆碱溶液。 3、 其他 蛙板、蛙心夹、蛙心插管、试管夹、小烧杯、滴管、丝线、玻璃分针。 1 破坏脑与脊髓 2 暴露心脏 ,观察心脏的结构 三 实验动物 四 实验步骤 插管： （具体方法请看示教） 在主动脉干下穿两根线，其中一根打活结备用。将心脏用玻璃分针向上翻至背面，将主动脉干下的另一根线向下拉，在静脉窦远端做一结扎（注意勿扎住静脉窦）。将心脏回复至原位，用眼科剪刀在左主动脉上靠近动脉圆椎处剪一斜口，将盛有少量林格液的蛙心插管由切口插入主动脉，插至动脉园锥时略向后退，尖端转向蟾蜍的背侧及左下方于心缩期插入心室内（不可插入过深，以免心室壁堵住插管下口）。插管若成功进入心室、管内液面会随着心室跳动而上下波动。此时可将预置线的活结扎紧，并固定于插管。 4 游离心脏 提起插管，在结扎线远端分别剪断左主动脉和右主动脉，在窦房结远端剪断左右肺静脉和前后腔静脉，将心脏离体。用滴管吸净插管内余血，加入新鲜任氏液。反复换洗数次，直至液体完全澄清。保持灌流液面高度恒定（1~2cm），即可进行实验。 ? [实验步骤] 5 连接实验仪器及标本 ? [实验步骤] （2）离子的影响 ①吸出插管内全部灌流液，换入0.65%NaCl观察心缩曲线变化，待效应明显后，吸出灌流液，用新鲜林格液换洗3次，直至心缩曲线恢复正常。 ②加入1~2滴2%CaCl2于新换入的林格液中，观察心缩曲线的变化。待出现效应后，用新鲜林格液换洗3次至曲线恢复正常。 ③加1~2滴1%KCl于新换入的林格液中，待出现效应后，再用林格液换洗至曲线恢复正常。 （3）递质的作用 ①加入2~3滴1:10000在肾上腺素溶液于灌流液中，待效应出现后，用林格液换洗至曲线恢复正常。 ②加入1~2滴1:10000乙酰胆碱于灌流液中，待效应出现后，用林格液换洗至曲线恢复正常。 五 观察项目 （1）描记正常蛙心收缩曲线 曲线幅度：代表心脏收缩的强度。 曲线疏密：代表心率。 曲线的规律性：代表心室的节律性。 曲线的顶点水平：代表心室收缩的程度。 曲线的基线：代表心室舒张的程度。 六 注意事项 ? 1. 蛙心夹应一次就夹住心尖，不宜夹多次，以免损伤心脏。 2. 每次换液时，插管内的液面均应保持恒定高度。 3. 在加化学药物与调换溶液时，须及时做好标记。 4. 各种溶液的吸管要分开，不可混淆，以免影响结果。 5. 每进行一项实验时，先记录一段正常对照曲线，然后再加入待试液，并记录其效应。 6. 注意滴加任氏液于心脏表面使之保持湿润。 7. 在实验过程中，基线位置及放大倍数、扫描速度等参数不要再变动。