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第八章 凋亡与肿瘤 生物有机体的死亡是一种不可抗拒的自然规律，生物有一定寿命，才能维持地球上的生态平衡，是生命得以繁衍，生生不息。就生物个体而言，在其整个的生长发育过程中，不断地发生细胞选择性死亡。这对保证机体生存，维持内环境的稳定是十分必要的。 大量的研究工作显示细胞凋亡和细胞增殖、分化具有同样重要的意义．细胞在有机体内部不断地衰老、磨损、畸变、过剩或已经完成功能或变为有害细胞，一般都是通过细胞凋亡加以清除；另一方面，又可通过细胞增殖加以补充，如人红细胞寿命仅为１２０天，人的嗜中性白细胞每天都有数亿个死亡，胃肠道上皮１－３天更新一遍。胚胎期肢芽发育成分离的手指或趾；蝌蚪变成蛙时尾巴受甲状腺素的作用，细胞凋亡而退化，用甲状腺素处理可使尾巴提前退化。自身反应性T、B淋巴细胞或癌细胞均可通过细胞凋亡加以清除，因而细胞凋亡是机体的一种自我保护机制，是长期遗传、进化的结果，以保证生物的世代延续。 第一节??????? 细胞凋亡的基本特点及其检测方法 一、细胞凋亡和细胞坏死的区别 （一）?? 形态学特点 （二）?? 生物化学特点 １、非随机性DNA降解 ２、细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻 ３、保持充足的能量代谢直至细胞凋亡末期 二、评价细胞凋亡的方法 对凋亡的评价应采用多种方法的联合应用。 （一）?? 形态学 １、光镜 ２、电镜 （二）?? DNA电泳 （三）?? 流式检测法 （四）?? Annexin V（膜连蛋白 V）的检测 依赖钙的磷酸结合蛋白Annexin Ｖ能够和PS（磷脂酰丝氨酸）高亲和结合。根据这一原理，Annexin V作为检测细胞膜ＰＳ的敏感探针，用于凋亡细胞的检测。 （五）?? 原位末端标记技术 是根据DNA聚合酶能够填补双链DNA中单链的缺失部分的原理，应用标记的三磷酸腺苷形成新的DNA 三、细胞凋亡的生物学意义。 １、细胞凋亡对于多细胞生物体的 发育和稳态的维持至关重要。 ２、细胞凋亡对于维持机体的遗传稳定性十分重要 ３、细胞凋亡与衰老密切相关。 第二节 细胞凋亡的发生机制 一、凋亡发生的三个阶段 凋亡的发生发展概括为三个阶段： １、信号传导阶段 ２、中央调控阶段 ３、结构改变阶段 二、Caspases和死亡相关的细胞凋亡途径 （一）、Caspases的结构和活性特点 １、结构 （１） Caspases前体包括原结构域(prodomain)、大亚基、小亚基。 ２、活性特点 Caspases属于半胱氨酸蛋白酶，具有底物特异性，即特异的剪切天冬氨酸残基后的肽键 （二）死亡受体和Caspases的活化 １、死亡受体(death recepteor,DR) 是一类通过与相应配体结合，传递细胞凋亡信号的细胞膜蛋白，属于肿瘤坏死因子受体超家族该家族成员除了具有相似的、富集半胱氨酸的细胞外结构域外，其胞浆区内包含６０－８０个氨基酸组成的死亡结构域(death domain,DD)。死亡受体的配体属于TNF基因家族。 ２、 Caspases的活化（见１５３页图） （三） Caspases的作用底物 １、灭活细胞凋亡抑制蛋白 ２、以结构基因为靶子，导致细胞结构的解体 ３、以效应蛋白为靶子，导致其调节和效应结构域的解体 三、线粒体相关的细胞凋亡信号途径 （一）细胞凋亡过程中线粒体跨膜电位的变化 在线粒体，跨膜电位的维持部分依赖线粒体膜通透性转运孔（mitochondrial membrane permeability transition pore,MMP)。 MMP的持续开放和关闭诱导和抑制细胞凋亡。大多数凋亡诱导剂引起的各种类型细胞凋亡都伴随MMP的破坏和线粒体跨膜电位的下降。而且MMP开放引起的后果几乎都是致死性的。 （二）MMP开放导致线粒体释放caspases活化物。 １、 MMP的开放伴随线粒体外膜的物理性损伤 ２、线粒体外膜的物理性损伤导致定位于线粒体的caspases活化物的释放。 第三节 内源性细胞凋亡抑制物和Bcl-2基因家族 一、内源性细胞凋亡抑制物 １、Bcl-2家族的抗凋亡成员 ２、Caspase-8(FLICE)抑制蛋白（FLIP) ３、SODD(silencer of death domain) ４、IAP(inhibitor of apoptosis protein) ５、Survivin 二、Bcl-2家族的结构特点及其与功能的关系 (一）结构特点 １、由两大结构域组成 （１）跨膜结构域（transmembrane region,TM.) （２）Bcl-2同源结构域（Bcl-2 homology,B