甲型肝炎病毒IgM抗体测定课件.ppt

甲型肝炎病毒IgM抗体的测定 (捕获法) 酶联免疫吸附试验（ELISA法） 将抗体(抗原)包被在固相表面后，按不同的步骤加入待测抗原(抗体)和酶标抗体(抗原)，充分反应后用洗涤的方法，使固相上形成的抗原抗体复合物与其他物质分离，洗去游离的酶标抗体(抗原)，最后加入底物，根据酶对底物催化的显色反应程度，而对标本中的抗原(抗体)进行定性或定量。 ELISA类型 捕获法测IgM抗体 　　血清中针对某些抗原的特异性IgM常和特异性IgG同时存在，后者会干扰IgM抗体的测定。因此测定IgM抗本多用捕获法。  （1）包被抗体：用抗人μ链抗体包被固相载体上,形成固相抗人μ链; （2）加入病人的血清标本; （3）加入特异性抗原试剂;， （4）加入针对特异性抗原的酶标抗体， （5）加底物显色． 免疫球蛋白的结构 （一）轻链和重链 轻链（L链） κ链 λ链 轻链决定型别 κ型 λ型 正常人κ：λ≈2 ：1 捕获法 主要用于 血清中某种抗体亚型成分（如IgM）的测定。 实验原理 用抗人μ链抗体包被酶标板，用以捕获血清中IgM类抗体，然后用特异性HAVAg与IgM抗体结合，再加酶标抗HAV抗体，最后加底物显色，显色深浅与HAVIgM的含量成正相关。 试剂盒组成 1 抗-μ 链包被干板条 4×12 孔 2 抗-HAVIgM 阴性对照 1 ml×1 瓶 3 抗-HAVIgM 阳性对照 1 ml×1 瓶 4 HA-Ag 2.6 ml×1 瓶 5 酶结合物 2.6 ml×1 瓶 6浓缩洗涤液 20 ml×1 瓶（用蒸馏水 1：20 稀释） 7 显色剂 A 3 ml×1 瓶 8 显色剂 B 3 ml×1 瓶 9 终止液 3 ml×1瓶 操作步骤 1．将微孔条固定在支架上，按顺序编号。 2．分别将待测标本，阴、阳性对照100μl（2滴）加入相应的孔中，设空白对照孔。置37℃20分钟。 3．洗涤：甩去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置5秒，共三次，每次洗后均需扣干。 4．每孔加HA·Ag50μl，酶结合物50μl（空白对照除外），振荡混匀，置37℃20分钟。 5．洗涤：重复上述3 6．显色：每孔加显色剂A液50μl，再加显色剂B液50μl，振荡混匀，置37℃15分钟。 7.每孔加终止液50μl 结果判定 酶标仪读数：450nm波长630nm副波长读数， 临界值=阴性对照孔 OD 均值 × 2.1( 阴性对照 OD 小于 0.05 以 0.05 计算) 结果判定: S/CO≥1 为 HAV-IgM 阳性， S/CO1为 HAV-IgM 阴性。 Cut off value(临界值) Cut off value(临界值)：阴阳性判断值，简称CO值。 夹心法：若S/CO值1，为阳性； S/CO值1，为阴性； 竞争抑制法：若S/CO值1，为阳性； S/CO值1，为阴性。 HAV HBV 肝炎病毒---- HCV HDV HEV 其他（HGV、TTV） （SEN、TLMV） 甲型肝炎急性期血清标志物出现过程 要点： 1. HAV的传播途径(粪—口) 2. HAV的潜伏期(30天±2周) 3. 血清标志物出现的规律 4. 免疫学检测指标—HAV Ag 抗HAV总抗体 抗HAV-IgM 临床意义 血清中抗HAVIgM出现于感染的早期(