实验二 细菌的染色和细菌细胞构造的观察 课件_1.ppt

Exercise two 细菌的革兰氏染色和芽孢染色 目的要求 学习微生物涂片 掌握细菌的革兰氏染色和芽孢染色 进一步熟练掌握显微镜油镜的使用技术 观察和识别细菌细胞的特殊构造 实验原理——革兰氏染色原理 G﹢菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈紫色。 Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，沙黄复染后呈红色。 实验原理——芽孢染色原理 芽孢染色法的基本原理，用着色力强的染色剂孔雀绿或石炭酸复红，在加热条件下染色，使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内，进入菌体的染料经水洗后被脱色，而芽孢一经着色难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂染色后，芽孢仍保留初染剂的颜色，而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色，使芽孢和菌体更易于区分。 实验材料 涂片染色用的细菌培养物 实验程序Ⅰ（革兰氏染色的方法和步骤） 革兰氏染色法的观察 革兰氏染色的注意事项 革兰氏染色成败与否与许多因素有关 菌龄：要用活跃生长期的幼培养物作革兰氏染色 涂片厚薄：菌苔在生理盐水中涂片要均匀，局部不宜过厚,以免脱色不完全造成假阳性。 脱色时间（最为关键） 实验程序Ⅱ（芽孢染色的方法和步骤） 枯草芽孢杆菌的观察 实 验 报 告 根据观察结果，画出大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的形态图，并注明菌体染色后的颜色，说明是G+还是G-。 思　考　题 简单染色法中各步骤的注意事项是什么？ 要得到正确的革兰氏染色结果必须注意哪些操作？关键在哪几步？为什么？ 实 验 二 结 束 下周实验 实验三 放线菌的形态观察和霉菌的湿室培养（书中实验十一和实验十四） * 制作者：黄海婵（hhc@zjut.edu.cn） Tel:0571or 0571 实验内容 目的要求 实验原理 实验材料 实验程序 思考题 革兰氏染色原理 芽孢染色原理 革兰氏染色 芽孢染色 一般，有芽胞的杆菌和绝大多数和球菌，以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏正反应；弧菌，螺旋体和大多数致病性的无芽胞杆菌都呈现负反应。 １.大肠杆菌（Escherichia coli) 24h的斜面培养物。　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 ２.枯草杆菌（Bacillus subtilis) 12—16h的斜面培养物。 染色剂 吕氏碱性美蓝染液(或草酸铵结晶紫染液)，石炭酸复红染液，结晶紫染色液、卢戈氏碘液、95%乙醇、石炭酸复红液。  其它材料 显微镜、载玻片、接种环、镊子、酒精灯、各种染色液、火柴、无菌牙签、玻璃铅笔、蒸馏水、香柏油、擦镜纸、吸水纸、乙醇乙醚溶液等 涂片 蒸馏水 接种环 草酸铵结晶紫 碘 液 95%乙醇 自然干燥 媒染1min 脱色20~30s 初染1min、后水洗 固定 沙 黄 复染2min 干燥镜检 水洗时不要直接冲菌膜 水洗 水洗 水洗 每位学生一人一组，取大肠杆菌和金黄色葡萄球菌，做一块混合涂片，进行革兰氏染色。 录像演示 Gram stain of mixed culture Presence of both gram (+) purple cocci and gram (-) pink rods. 1.注意练习无菌操作； 2.在载玻片上滴半滴生理盐水； 3.取菌不要贪多，接种环上肉眼可见菌苔痕迹即可 另外 美 兰 复染2min 干燥镜检 孔雀绿 蒸馏水 涂片 接种环 自然干燥 固定 保持冒蒸汽5min 水洗 不要直接冲菌膜 每位学生一人一组，取枯草芽孢杆菌，进行芽孢染色。 录像演示 请值日生留下，打扫卫生 * * * *