血友病的实验室诊断戴菁课件.pptVIP

血友病的实验室诊断 凝血因子活性测定原理 血友病是最常见的遗传性出血性疾病，关节、肌肉及脏器自发性或轻微外伤后的出血是其主要的临床表现。实验室检测在血友病诊断中具有重要的作用，不仅可以确定血友病的类型，还可以进行血友病严重程度的分型及预后判断。 凝血因子活性测定原理 血友病A：凝血因子VIII质或量的缺乏 血友病B：凝血因子IX质和量的缺乏 两种因子均属于内源性凝血途径 凝血因子活性测定原理 筛选试验 纠正试验 确诊试验 鉴别试验 排除试验 抗体检测 凝血因子活性测定原理 内源性凝血系统的有关试验 APTT或SCT在血友病时可异常。 （1）APTT: 参考值是31～43秒（各实验室可根据实际情况建立本实验室的参考值），一般可检出FⅧ:C?25%的患者。 部分敏感度高的试剂可以检测出FVIII:C、FIX:C活性在40% ～50%的亚临床型血友病患者（如Actin FS等） （2）SCT : 参考值为15～32秒。本试验可以检出FⅧ:C 25%～45%的患者。 部分基层单位可选用试管法CT及RT进行检测，检测范围分别为2%和4%，无需特殊仪器及试剂。 凝血因子活性测定原理 操作繁琐，耗时费力，敏感性和特异性较差，结果可能存在假阴性。容易引起漏诊、误诊，不建议采用 凝血因子活性测定原理 FⅧ（FⅨ）的促凝活性（FⅧ:C/FⅨ:C）及抗原含量（FⅧ:Ag/FⅨ:Ag）测定。 根据FⅧ:C（FⅨ:C）水平的高低，将血友病A(B)分为： 重型（?2%） 中型（2～5%） 轻型（5～25%） 亚临床型（?45%） 出血时间（BT）、血管性血友病因子（vWF:Ag）检测：可以作为血友病与血管性血友病（vWD）的鉴别试验，vWD时，BT延长，vWF：Ag降低。 血浆凝血酶原时间（PT）检测 可以初步鉴别血友病性出血与外源性凝血系统凝血因子缺乏所致的出血。 血浆FⅫ、FⅪ、FⅩ、FⅤ、FⅡ活性和纤维蛋白原含量测定 可以用来进一步确定FⅫ、FⅪ、FⅩ、FⅤ、FⅡ及纤维蛋白原缺乏 常用复钙交叉试验或APTT交叉试验作为排除获得性血友病的筛选试验。获得性血友病时，相应抗体的滴度增高。 凝血因子活性测定原理 基于APTT的凝血因子活性测定：内源性凝血因子，包括 FⅧ:C, FⅨ:C, FⅪ:C, FⅫ:C, FⅩ:C 基于PT的凝血因子活性测定：外源性凝血因子，包括 FⅦ:C, FⅡ:C, FⅤ:C, FⅩ:C FⅧ:C 检测原理 基于APTT测定 方 法 1.样本、标准品和质控标本准备： 用因子稀释液对样本进行稀释： 标准品：1/10（100%） 样本：1/10，1/20，1/40（非常重要） 浓度极低时可采用1/5，1/10，1/20 质控标本：根据要求 准备乏因子血浆，根据说明书进行复溶，置室温一定时间后备用 将试剂和样本置于仪器中的相应位置，先进行标准曲线定标，后再进行样本检测 结果分析 标准曲线：在半对数表（因子活性取对数，APTT时间取直线）上做出标准曲线 在半对数表上作样本的曲线（三个稀释度对应三点APTT值） 结果分析 平行曲线：读取标准曲线上相对应的因子活性 不平行曲线：提示有抑制物存在，进行抑制物检测，包括因子抗体和狼疮抗凝物 凝血因子活性检测 FⅧ为例： 注意事项 确定乏因子血浆为真正的乏因子血浆 注意事项 使用同一批号的APTT试剂：APTT试剂的激活程度各批号间存在差异 乏因子血浆更换批次时需重新定标 因子Ⅷ抑制物测定 抗体的确定和定量均是在待检血浆中加入外源性因子（如正常混合血浆）形成混合物，即刻或经一定时间孵育后，检测目的因子活性减低的量，同时检测对照（用确定不含抗体的血浆）中因子活性减低程度。 检测因子活性的方法可以采用一步法（APTT）或发色底物法。 免疫法检测不适合于抗体测定，因为其不能区分所检测的抗体是否具有生物学活性 抗体类型 时间依赖型抗体：FⅧ 时间非依赖性抗体：其他相关凝血因子抗体 抗体检测临床意义 抗体阳性：获得性 替代治疗后产生抗体 指导免疫抑制剂的使用 指导所需因子的使用量 监测出血倾向 筛选试验 混合试验：不需要乏因子血浆 APTT 50/50： PT 50/50：同APTT 50/50 筛选试验的结果判读 若APTT被纠正的值超过正常血浆与检测血浆的APTT差值的50%，则提示存在凝血因子缺陷 若APTT纠正微弱，则提示可能存在抑制物，可以是某一凝血因子特异性的抑制物，也可以是非特异性的抑制物，如狼疮抗凝物。 筛选试验的结果判