血清学诊断在结核病中的临床应用价值课件.ppt

结核病的历史 血清学诊断技术 血清学诊断技术优势：是一种对疾病进行早期诊断的理想方法。 无需活细胞培养和特殊仪器设备 操作简便 结果显示快速 目前用于血清学诊断的主要方法: 酶联免疫吸附试验(ELlSA) 斑点金免疫渗滤法(DIGFA) 免疫印迹法(Western Blotting)等等 脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)抗原 脂阿拉伯甘露聚糖是分枝杆菌细胞壁的重要组成部分，是属特异性抗原，具有较强的免疫原性和免疫调节功能，可刺激机体产生相应的抗体，因而是结核病的血清学诊断应用较广的抗原。 有关LAM抗原的应用报道很多, Antunes等用美国生产的结明(MycoDot TM)试剂盒检测活动性肺结核病人的敏感性为63.0%，特异性为92.4%，认为检测LAM抗体是结核病一项有效的辅助诊断方法。 A60(antigen 60) A60是从牛分枝杆菌胞浆中提取的一种大分子物质，是脂质蛋白和多糖的复合抗原。 Wu等用ELISA法检测了178例活动性肺结核患者和151例其他疾病患者血清中的IgG A60，根据受试者工作特性曲线(ROC)取261.2单位为截切值(cutoff point)，其敏感性和特异性分别为49.4%和79.5%，认为胸部X片异常的患者结合IgG A60阳性将有助于肺结核病的准确临床诊断。 结核菌糖脂(TBGL)抗原 结核菌糖脂抗原是分枝杆菌细胞壁上的糖脂类物质，具有菌属特异性。近年来的研究表明，糖脂类抗原在诊断方面有很大的优势。 Maekura等建立了糖脂类抗原抗体快速检测方法，并做了临床评价，对痰涂片阴性的活动性肺结核的灵敏度为56.8％，对痰培养阴性的活动性肺结核的灵敏度为51.2％。将TBGL与核酸扩增方法(NAA)联合用于检测，检出率比两者单独使用时进一步提高。Tiwari等用脂质体颗粒作为载体，利用纯化的TBGL抗原特异的与结核病患者血清中的TBGL抗体结合，形成蓝色凝集颗粒来诊断活动性结核病，其敏感性、特异性分别达94%和98.3%。该方法快速(4min)、经济，且可以区别活动性肺结核、卡介苗(BCG)免疫接种者与健康人群，可用于人群大规模筛选肺结核病人。 38kDa蛋白 38kDa蛋白是一定位在质膜上的磷酸盐转运蛋白，只在分枝杆菌复合体中表达，BCG合成38kDa蛋白的量仅为结核分枝杆菌的十分之一。 38kDa 蛋白为一分泌蛋白，可刺激T细胞和B细胞免疫反应，广泛应用于结核病的血清学试验。 英国公司生产的OMEGA结核抗体定量检测Myco G、A、M试剂盒联合应用38kDa和脂多糖(LPS)抗原，而TB Complex Plus试剂盒选用的是38kDa和16kDa抗原。Butt等对OMEGA试剂盒进行了评价，认为具有种特异性的TB Complex Plus和有属特异性的Myco M联合应用可取得最好的效果，检测肺结核的敏感性和特异性分别为87%和93%。38kDa对活动性肺结核的诊断非常有效，但和大肠埃希菌同源蛋白有 30%以上的交叉，所以对不同人群的灵敏度波动较大，尤其对涂片阴性和合并HIV感染的结核病患者效果较差。 Ag85 抗原85复合体(Ag85) 是一组具有较强细胞免疫及体液免疫活性的分枝杆菌分泌性蛋白，分子量约为30～32kDa。分枝杆菌各菌株均可分泌Ag85。结核分枝杆菌Ag85中至少包括三种蛋白成分—Ag85A、Ag85B和Ag85C，其中有免疫作用的主要为Ag85A和Ag85B。 Ag85具有分枝菌酸转移酶的活性，在分枝杆菌细胞壁合成的最后阶段发挥必要的作用。它还能和人纤连蛋白(FN)相结合，有助于结核菌入侵宿主细胞。 Ag85可能发展成为结核病的血清学诊断抗原。活动性结核病人血清中的Ag85抗体平均水平比其他分枝杆菌疾病患者和健康对照者高50～150倍，可通过检测血循环中Ag85抗体，对活动性结核加以诊断。Kashyap等用间接ELISA法检测89%疑似结核性脑膜炎患者脑脊液中存在Ag85抗体，认为检测Ag85抗体为结核性脑膜炎的早期和确定性诊断提供了一个更灵敏的选择。 ESAT-6和CFP10 ESAT-6即6kDa早期分泌性抗原，是从结核分枝杆菌短期培养滤液中分离纯化出的一种低分子量分泌性蛋白，具有较强的细胞免疫活性，在抗结核感染的免疫回忆应答中起重要作用。 ESAT-6仅存在于致病性分枝杆菌中，包括人型结核杆菌、牛型结核杆菌、非洲分枝杆菌以及苏尔加分枝杆菌、海水分枝杆菌和堪萨斯分枝杆菌等非典型分枝杆菌，而BCG及其他非致病性分枝杆菌缺失。 CFP-10即培养滤液蛋白10，与ESAT-6位于同一基因簇上，两者分布相同，都是RDl区编码的。ESAT-6和CFP10能刺激机体产生特异性IgG，利用ESAT-6和CFP10蛋白抗原能与结核分枝杆菌感染者血中特异性 IgG