体外培养状态下大鼠骨髓基质细胞成软骨潜能实验研究及细胞粘附因子N-Cadherin, fibronectin在分化诱导中作用（可编辑）.docVIP

体外培养状态下大鼠骨髓基质细胞成软骨潜能实验研究及细胞粘附因子N-Cadherin, fibronectin在分化诱导中作用 The Experimental Study on the Chondrogenesis In vitro ofRat Mesenchymal Stem Cells and the Expression of N- Cadherin, fibronectin during Cell Differentiation 李文革指导教师姓名: 徐莘香 职称: 教授 单位:吉林大学第一医院 专 业 名 称:外科学(骨科) 论文达辩日期: 答辩委员会主席: 论文评阅人: 本论文是 我的导师??著名骨科学家徐莘香教授亲自 指导下完成的。导师严谨的治学态度,实事求是的科研作 风,勤恳的敬业精神令我终生受益。在此向我的导师徐莘 香教授表示深深的敬意及由衷的感谢!提 要目的:探讨大鼠骨髓间质干细胞体外成软骨潜能及粘附因子在诱 导分化中的作用。材料及方法:⑴ 体外分离大鼠骨髓间质干细胞, 以 TGF-β,地塞米松,多聚赖氨酸为体外诱导因子,从形态学,组 织学检测转化效果。⑵ 在诱导过程中,于不同时间点取材,固定, 用免疫组织化学法检测 N-cadherin,Fibronectin 表达程度,同时 向诱导体系内加入不同剂量的抗 N-cadherin,Fibronectin 抗体, 观察细胞小结形成情况。结果:在成软骨诱导剂作用下,骨髓间质 干细胞定向性转化为软骨起源细胞,可作为软骨组织工程的种子细 胞。粘附分子 N-cadherin,Fibronectin 在细胞分化诱导中发挥重 要作用。 关键词:组织工程骨髓间质干细胞软骨生成 细胞粘附因子 诱导 目 录 第一部分 绪论 第一章 文献综述 第一节 关节软骨损伤研究进展 第二节 细胞粘附与骨发生 第三节 凝集-----万泉之源 第二部分 实验研究 第一章 体外大鼠骨髓间质干细胞成软骨潜能实验研究 第一节 前言 第二节 材料与方法 第三节 结果 第四节 讨论 第二章 粘附因子 N-cadherin,Fibronectin在诱导分化中表达 第一节前言 第二节材料与方法 第三节结果 第四节讨论 第三部分 结论 第四部分 附录 1、 参考文献 2、 发表论文 3、 附图 4、 中文摘要 5、 英文摘要 绪论第一章 文献综述第一节 关节软骨损伤的研究进展关节的退行性变,创伤,炎症和先天性疾病常引起关节软骨的缺损及 破坏。由于关节软骨的再生能力有限。一经损坏,其修复十分困难,最终导致 关节面缺损,须行关节融合术,给患者带来痛苦[1,2]。因此,多年来如何建 立一种有效的修复方式一直为众多学者关注。 1关节软骨的生物学行为 关节软骨为覆盖关节面的一层光亮的结缔组织,其功能为传导及分布载 荷,维持和承受接触应力。 关节软骨 面富有弹性,摩擦系数小,能吸收和缓 冲震荡[3]。关节软骨主要由软骨细胞,软骨基质组成。后者由糖蛋白,胶原及水构 成[4]。软骨细胞占软骨的 1%-10%,其功能是合成及降解胶原及蛋白多糖。关 节软骨中含有 10-15%的蛋白多糖,其对水有很强的亲和力,使软骨具有压弹性 质。随着年龄的增高,其成分硫酸软骨素含量降低,而纤维化程度增高。可能 为导致关节软骨退行性变的一个重要原因。人体胶原主要由 II 型胶原组成 [5]。占全部胶原的 85-90%。I型胶原仅见于关节表面及半月板。Mayne[6]发现 II 型胶原不形成大的纤维束,原纤维较细,缺乏交叉连接的形式,这些特点使 原纤维容易散开,增进了组织内原纤维与蛋白多糖的并列排列,以适应关节功 能,其拱型排列使软骨具有抗剪切作用。 关节软骨从关节面至骨软骨连接处垂直分为四层:①浅层:单个散在的软 骨细胞呈扁平状。②中间带:软骨细胞变圆,呈小群聚集。③放射层:软骨细 胞聚集呈柱状④钙化层:为嗜碱物质和钙盐沉积处。⑤ 在放射层与钙化层之间 有一较明显的嗜碱线,称之为潮线。有时将钙化层及软骨下骨组织统称为软骨 下骨板[7],它不仅起支持作用,而且还参与软骨和骨髓腔之间的营养交换。 2. 关节软骨缺损的自发修复成熟关节软骨修复能力有限。直径小于 3mm 的缺损可获部份或全部修复 [8],而直径大于 4mm一般不能自发修复[9]。Shands 认为表浅损伤限制软骨 再生,全层缺损可能修复较快[10]。尤其是全层小缺损[11],术后 2天即见间 充质细胞长入,8 周出现透明软骨,12 周开始退化。但也有学者认为未成熟的 软骨细胞可有部分增生能力。尚需进一步证实。3自体或异体软骨移植 3.1 自体移植: 由于无排异反应,且均为活细胞,易成活。但其来源有 限,临床应用